Pipetlemenin doğruluğu ve kesinliği, sonraki uygulamalar üzerinde önemli bir etkiye sahip olabilir ve hatanın derecesine bağlı olarak, kötü pipetleme uygulamaları yanlış sonuçlara ve başarısız deneylere yol açabilir. Birçok laboratuvar için gerekli olmakla birlikte, manuel pipetleme, otomatik sıvı işlemeye göre daha yüksek hata ve kontaminasyon riski taşır ve ayrıca normal pipet kullanıcıları için tekrarlayan gerinim yaralanması (RSI) ile ilgili endişeleri artırır. Ancak rutin manuel pipetleme, yaygın hatalardan kaçınarak ve en iyi uygulamaları takip ederek yine de doğru, kesin ve güvenli olabilir. Tekniğinize ve sonuçlarınıza olan güveninizi artırmak ve RSI'nin tekrarlayan pipetleme görevlerini önlemek için pipetleme işleminin "yapılması" ve "yapılmaması gerekenlerden" bazıları burada verilmiştir.
YAPMAYIN: Pipet ucunu numune solüsyonunun çok derinine batırmayın
Pipet ucunun aşırı batırılması çok yaygın bir hata kaynağıdır ve yanlışlığı 2 kat veya daha fazla artırabilir (daldırma derinliği ideal olduğunda %0,2-0,4'lük hataya kıyasla %0,6-0,8'lik hata getirir). Doğruluk üzerindeki bu olumsuz etki, çok küçük numune hacimlerinde (ör. 1-10 µL) daha da belirgindir ve aşırı durumlarda, pipet ucunun ucu kabın dibine değdiğinde, sıvının aspirasyonu engellenir ve uç zarar görebilir.
YAPIN: İstenen hacmin etkin şekilde aspirasyonu için ucu yalnızca gerektiği kadar derine batırın
Tam hacim aspire edilmeden önce açıklığın sıvının üzerine çıkmasını önlemek için ucun yeterince daldırıldığından emin olun: ASTM International (eski adıyla American Society for Testing and Materials) tarafından belirlenen standartlara göre, 2-3 mm'lik bir daldırma derinliği 1-100 µL hacimler için, 101-1000 µL hacimler için 2-4 mm ve 1,1 ila 10 mL hacimler için 3 ila 6 mm önerilir. 2 Çok küçük hacimler için (1µL'den az) 1 mm kadar küçük bir daldırma derinliği gerekli olabilir. 3 Uygulamanız için ideal daldırma derinliğinden emin değilseniz pipetinizin kılavuzuna veya ilgili standartlara bakın.
YAPMAYIN: Aspirasyon sırasında pipeti açılı tutmayın
Pipet ucu 90 dereceden çok uzak bir açıyla daldırıldığında, pipetin kalibre edildiği zamana göre sıvı seviyesindeki sapmalar nedeniyle çok fazla sıvı emilebilir. 4 Örneğin, dikeyden 30 derecelik bir daldırma açısında, %0,7'ye kadar fazla hava aspirasyonu meydana gelebilir. Aşırı daldırma derinliği ile birleştiğinde, geniş açıda aspirasyon, ideal koşullara kıyasla yanlışlığı 3 ila 5 kat (%1-1,2 yanlışlık) artırabilir. 1
YAPIN: Aspirasyon sırasında pipeti mümkün olduğunca dikey ve düz tutun
İdeal olarak, uç tam olarak 90 derecelik bir açıyla batırılmalıdır, ancak genellikle daldırma açısının dikeyden 20 dereceyi geçmemesini sağlamak çok önemlidir. 4
YAPMAYIN: Tamamen kuru hava deplasmanlı uç kullanarak pipetleme yapın
Hava yer değiştirmeli bir pipet ucunun hava yastığına örnek buharlaşması, uçtan beklenenden daha düşük bir hacmin dağıtılmasına neden olabilir. Aspire edilen numunenin buharlaşması, önceden ıslatılmamış taze, kuru bir uca çekildiğinde daha fazla olacaktır. 5
YAPIN: Pipetlemeden önce her pipet ucunu önceden ıslatın
Hava deplasmanlı bir pipet ucunu önceden ıslatmak için, ayarlanan numune hacmi birden çok kez aspire edilmeli ve dağıtılmalıdır; Uluslararası Standardizasyon Örgütü (ISO) tavsiyelerine göre en az beş kez. Bu, zaman alıcı bir süreç olabilir ve uygulamanın doğruluk ve kesinlik gereksinimlerine bağlı olarak daha az ön ıslatma turu yeterli olabilir; örneğin, birçok üretici üç ön ıslatma döngüsü önermektedir. Ne olursa olsun, hava yastığındaki nemi arttırdığı ve böylece numunenin buharlaşmasını önlediği için uçların önceden ıslatılması önemlidir.
YAPMAYIN: Zorlu numuneler için uygun olmayan bir pipet ucu kullanmayın
Hava yer değiştirmeli pipetleme, sulu çözeltileri ortam koşullarında işlemek için uygundur, ancak ortam sıcaklığından daha yüksek veya daha düşük sıcaklıklara (soğuk tutulması gereken kısıtlama enzimleri gibi), yüksek viskoziteye (örn. gliserol) veya yüksek uçuculuğa (örn. . metanol), hava yastıklı pipet uçlarında sorunlarla karşılaşılabilir. 6 Düşük sıcaklıklar hava yastığını daraltarak aşırı iletime yol açarken, yüksek sıcaklıklar hava yastığının genişlemesine ve yetersiz iletime yol açabilir. Viskoz numuneler, hava yer değiştirmeli bir pipet ucuna çok hızlı çekildiklerinde oluşan hava kabarcıkları nedeniyle yetersiz iletilebilir ve uçucu sıvılar, diğer sıvılara göre hava yastığına buharlaşmaya daha yatkındır.
YAPIN: Zorlu numuneler için pozitif yer değiştirme veya başka bir uygun pipet ucu kullanın
Zor sıvı işleme için en iyi çözümlerden biri, numuneyle doğrudan temas eden bir piston içeren pozitif yer değiştirmeli pipet uçlarının kullanılmasıdır. Hava yastığı uçlarından daha pahalı ve değiştirilmesi zor olmakla birlikte, pozitif yer değiştirmeli uçlar, hava yastığı genleşmesi ve büzülmesi, viskoz sıvılarda hava kabarcığı oluşumu ve çok uçucu sıvıların buharlaşması gibi sorunları önler. Bununla birlikte, bazı hava yer değiştirme uçları (özellikle küçük bir hava yastığına sahip olacak şekilde tasarlanmış olanlar gibi), zorlu sıvı numuneleriyle ilişkili sorunları da azaltabilir.
YAPMAYIN: Pipeti uzun ve sürekli olarak kullanmayın
Pipetleme görevlerinin tamamlanması bazen saatler alabilir, ancak uzun süre ara vermeden sürekli pipetleme yapmanın birçok olumsuz etkisi vardır. Vücutta - özellikle başparmak, el ve bilekte - tekrarlanan pipetleme kuvvetleri ve zorlanmasından kaynaklanan RSI'nin uzun vadeli sağlık sonuçları olabilir ve bu tekrarlayan hareketler kesintisiz gerçekleştirilirse riskler artar. 7 Ek olarak, pipeti çok uzun süre tutmak, vücuttaki ısının el yoluyla pipete aktarıldığı ve sonuçları etkileyebilecek bir sıcaklık değişikliğine neden olduğu el ısınması nedeniyle doğruluğu ve kesinliği etkileyebilir.
YAPIN: Pipetleme sırasında düzenli molalar verin
RSI'yi önlemek için ABD Mesleki Güvenlik ve Sağlık İdaresi (OSHA), her 20 dakikalık pipetleme için 1 ila 2 dakikalık ara verilmesini önerir. El ısınma etkilerinden kaçınmak için, pipeti tutmaya devam etmek yerine pipetleme döngüleri arasında standına yerleştirin. 4
YAPMAYIN: Pipet ucunu takmak için aşırı güç kullanmayın
Uç ile pipet arasında bir sızdırmazlık oluşturmaya çalışmak için kullanılan çarpma, döndürme veya sallama hareketleri hem RSI riskini artırabilir hem de uçta hasara neden olabilir. Kullanılan uçlar pipetleme cihazına tam olarak uymuyorsa (örneğin, uçlar ve pipetler farklı üreticiler tarafından yapılmışsa) kullanıcılar ucu kolayca takmak için mücadele edebilir.
YAPIN: İyi oturan uçlar kullanın ve bunları takmak için minimum miktarda güç kullanın
Her zaman kullandığınız pipet uçlarının pipetleme cihazıyla kullanıma uygun olduğundan emin olun; iyi oturan uçlar, çarpmaya, döndürmeye veya sallamaya gerek kalmadan kolayca bir conta oluşturmalıdır. Uçları takarken, el, bilek ve kol üzerindeki gerilimi azaltmak amacıyla yalnızca bir conta oluşturmak için gereken minimum miktarda kuvvet kullanın.
YAPMAYIN: Pipeti yan tarafına yerleştirin
Bir pipeti yan tarafı üzerine, özellikle de ucu takılıyken sehpanın üzerine yerleştirmek, sıvıların veya buharlaşan nemin hazneye sızarak kontaminasyona, korozyona veya diğer hasarlara neden olma riskini taşır.
YAPIN: Pipeti standında dik olarak saklayın
Kısa bir süre için bile olsa pipeti tutmadığınızda, uç ucu her zaman piston ucunun altında olacak şekilde dik olarak standına veya rafına sabitleyin.
YAPMAYIN: Acele Etmeyin
Bir pipetleme seansını hızlandırmak cazip gelebilir, ancak adımları aceleye getirmek yanlış ve kesin olmayan sonuçlara yol açabilir. Aspirasyon sırasında ucun çok hızlı geri çekilmesi, istenen tüm sıvı hacminin uca girmesini engelleyebilir. 8 Ek olarak, numunelerin çok hızlı aspire edilmesi, özellikle viskoz numuneler, hava kabarcıklarının oluşmasına neden olabilir ve çok hızlı dağıtım, yetersiz dağıtıma veya sıçrama nedeniyle bazı numunelerin kaybolmasına neden olabilir.
YAPIN: Yeterli duraklamalar yapın ve pistonu düzgün, sabit bir hareketle çalıştırın
İstenilen hacmin tamamen aspire edilmesini sağlamak için ucu çıkarmadan önce en az bir saniye sıvının içinde tutun. Piston, özellikle viskoz sıvılarla çalışırken, yavaşça ve aşırı kuvvet uygulamadan bastırılmalı ve bırakılmalıdır. Yavaşlamak, sonuçların kesin ve tekrarlanabilir olmasını sağlamak için gerekli olan sabit ve tutarlı bir pipetleme ritmi elde etmeyi kolaylaştırabilir.