Oligosakaritlerin Ayrılması – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri
Katyon Değişim Kolonları
Yeni reçine bazlı özel karbonhidrat kolonları, güçlü bir asit katyon değiştirici üretmek için işlevselleştirilmiş% 8 çapraz bağlı stiren-divinilbenzen kopolimeri kullanır. Bu sütunlar genellikle bir C’de çalıştırılır, ancak bileşenleri aynı derecede polimerizasyonla yapılır, örn. maltoz ve sükroz.
Bu kolonları kullanarak, tercih edilen karşı iyon kalsiyumdur ve başlangıçta M kalsiyumasetat ve ardından M kalsiyum asetat içeren gerekli mobil faz ile uygun hale getirilebilirler. Ön dengeleme için yaklaşık 12 saat gereklidir. Sodyum karşı iyonları, belirli durumlarda değerli olabilecek farklı bir seçicilik sunar.
Glikoz ve galaktoz ve mannitol ve glusitol gibi zor sakarit çiftlerinin ayrılması büyük ölçüde asetonitril konsantrasyonuna bağlıdır.
Gösterilen sistem monosakkaritlerin çoğu ve karışık di- ve trisakkaritler için iyi ayrımlar göstermektedir. Bununla birlikte, bazı sakarit kombinasyonları, alternatif mobil fazlar veya durağan fazlar ile çözülmesi gereken hala problemler ortaya çıkarmaktadır. Standart sakkarit karışımlarının ayrılmasına ilişkin diğer referanslar, literatürde bulunabilir.
Katyon değişimli HPLC’nin gıdalardaki sakaritlerin ayrılmasına uygulanması, çilekli yoğurt sakkaritlerinin ayrılmasıyla gösterilmektedir. Katyon değişim HPLC ayrıca sakkaritlerin melastan ve odun hamurundan ayrılması için de kullanılmıştır.
Ters Faz Sütunları
Ters fazlı HPLC, sakaritlerin kromatografik çözünürlüğü için nadiren kullanılır; bununla birlikte, sadece ara sıra ayırmaların gerekli olduğu durumlarda, birçok laboratuvarda ters faz kolonlarının geniş ölçüde bulunması, özel bir karbonhidrat kolonunun satın alınmasını önler.
Ters fazlı HPLC, esas olarak oligosakaritlerin ayrılması için kullanılmıştır ve ayırma, polimerizasyon derecesine bağlıdır. N-alkilaminler gibi organik faz değiştiriciler, sakkaritler için arttırılmış kapasite ve seçicilik sağlamak için kullanılabilir.
Oligosakkaritler nedir
Oligosakkaritler hangileridir
Oligosakkaritler hangi besinlerde bulunur
Oligosakkaritler nelerdir
Oligosakkaritler nelerde bulunur
Sindirilemeyen oligosakkaritler nelerdir
Oligosakkarit nedir
Fruktooligosakkaritler nedir
Oligosakaritlerin Ayrılması
Hayvan dokularından veya vücut sıvılarından alınan oligosakaritlerin HPLC analizi, moleküler ağırlık dağılımlarını belirlemek için kullanılmıştır. İnsan sütü oligosakaritlerini ayırmak için ters fazlı HPLC kullanılmış olmasına rağmen, karmaşık oligosakarit ayrımlarının çoğu, molekülleri zincir uzunluğuna göre ayıran kimyasal olarak bağlı amin kolonları kullanılarak gerçekleştirilmiştir.
Ters faz sistemi, moleküllerdeki stereokimyasal farklılıklara duyarlı olduğu için amin kolonları için yararlı bir tamamlayıcıydı. Glikoprotinlerin bir parçası olarak bulunan birçok oligosakarit, sialik asit, fosfat veya sülfat kalıntılarının varlığı nedeniyle negatif olarak yüklenir. Anyon değişimli HPLC, bu tür glikoproteinleri yük farklılıklarına göre ayırabilir.
% 3 trietilamonyum asetat içeren su-asetonitril ile yıkanan amin bağlı kolonlar, glikoproteinleri net karbonhidrat içeriklerine göre ayırmak için kullanılabilir. Eklenen tuz, iyonik etkileri etkili bir şekilde bastırdı.
Benzer şekilde, hem maymundan hem de insandan gelen karmaşık sialilloligosakkaritler, bu yöntem kullanılarak ayrılmıştır ve glikoproteinlerin ve hiyaluronik asidin kompleks zincirlerinde bulunan izomerik oligosakaritlerin ayrılması da yakın zamanda açıklanmıştır.
Kalıtsal insan lizozomal depolama bozukluklarının teşhisi, kimyasal olarak bağlı amin kolonlarında yüksek oranda mannoz veya galaktozil oligosakkarit içeren oligosakkaritlerin varlığı için idrar analizi ile kolaylaştırılmıştır.
Benzer şekilde, tavuk ovomukoidinde bulunan oligosakkaritlerin analizi, ilk hidrazinolizden sonra yapılmıştır. Bu analizler, elüent olarak asetonitril-su karışımları kullanılarak normal faz modunda gerçekleştirilmiştir.
Genel olarak mobil fazın su içeriğinin% 45’e yükselmesi, oda sıcaklığında 15 birim uzunluğa kadar oligosakaritlerin elüsyonuna izin verir. Kolon sıcaklığındaki bir artış, tutma sürelerini azaltır ve daha uzun oligosakaritlerin elüsyonunu artırır. Çok daha büyük oligosakaritleri (örneğin, nişasta) ayrıştırmak için sulu boyut dışlama kromatografisi gereklidir.
Tespit Etme
En yaygın HPLC algılama yöntemi, UV emilimini izlemektir. Ne yazık ki, sakkaritler, 230-300 nm dalga boyu aralığında saptamaya izin vermek için uygun bir kromofora sahip değildir. 185-195 nm bölgesinde tespit edilebilmelerine rağmen, bu dalga boyu aralığındaki çok yüksek kaliteli çözücülere duyulan gereksinim, bu tekniğin genel kullanımını engellemektedir.
Bununla birlikte, hem glikoz hem de fruktoz için, UV izleme kullanan saptamanın duyarlılığının, kırılma indisi saptamasından daha iyi olabileceğine dikkat edilmelidir.
Sakkaritlerin kimyasal modifikasyonu, maksimum absorpsiyonlarını klasik UV tespitini kolaylaştıran ancak bu metodolojinin popüler kullanımını engelleyen doğal sorunlardan muzdarip olan bir aralığa kaydırmak için ideal bir araçtır.
Kırılma indisindeki değişikliklerin tespiti sakaritlerin tercih edilen tespit yöntemidir ve tespit limitleri 10-40 pg aralığındadır ve kullanılan spesifik sisteme bağlıdır.
Daha yakın zamanlarda, gradyan elüsyonu ile kullanılabilen ve kırılma indisi detektörlerinden 10 kat daha fazla hassasiyete ulaşan kütle detektörleri açıklanmıştır. Sakaritlerin saptanması için daha az yaygın teknikler arasında sintilasyon sayımı ve elektrokimyasal saptama bulunur.
Sütun Sonrası Türevlendirme
Sakkaritlerin saptanması için popüler bir alternatif, kolon sonrası türetmeyi kullanmaktır. En popüler yöntem, sakkaritin, emilimin 530 nm’de ölçülmesine izin veren tetrazolyum mavisi ile türetilmesidir.
Bu reaksiyon, sakkaritlerin indirgenmesini gerektirir ve bu nedenle birçok bileşene uygulanabilir, ancak örneğin sükroz ve inülini hariç tutacaktır. Bu gibi durumlarda, sükrozu glukoza dönüştürmek için beta-fruktosidaz ile kolon öncesi işlem veya inülini fruktoza ve glukoza dönüştürmek için hafif asit hidrolizi gereklidir.
Alternatif kolon sonrası türevlendirme reaktifleri, 295 nm’de tespit edilebilen bir sakarit-kupramonyum kompleksinin üretimini, periyodat ile reaksiyonu ve 260 nm’de absorbans kaybı ile saptamayı, 2-tert-butilantrakuinon ile reaksiyonu ve foto indirgeme floresanı ile saptamayı içerir. seryum (1V) ile reaksiyon ve floresan ölçümü ile tespit edilir.
Prostaglandinler, lökotrienler ve hidroksiikosatetraenoik asitler
1957 ve 1964 arasında Bergstrom ve arkadaşları tarafından ilk prostaglandinlerin izolasyonu ve tanımlanmasından bu yana, bu bileşiklerin bir dizi patolojik durumun etiyolojisindeki rolü ile ilişkili araştırmalarda büyük bir genişleme olmuştur.
Tüm önemli prostaglandinler, lökotrienler ve hidroksiieikosatetraenoikasitler (HETE’ler), araşidonik asitten türetilir ve enflamatuar ve alerjik reaksiyonların önemli aracıları olarak tanımlanmıştır.
Bu bileşik gruplarının her biri, biyolojik araştırmanın birçok alanında büyük ilgi uyandırdığından, kantitasyona izin vermek için bir dizi farklı tahlil sistemi tasarlanmıştır: biyoanaliz, gaz kromatografisi-kütle spektrometrisi, radyoimmunoassay (RIA), ince tabaka kromatografisi ( TLC).
Fruktooligosakkaritler nedir Oligosakkarit nedir Oligosakkaritler hangi besinlerde bulunur Oligosakkaritler hangileridir Oligosakkaritler Nedir Oligosakkaritler nelerde bulunur Oligosakkaritler nelerdir Sindirilemeyen oligosakkaritler nelerdir