EN 14476 Testi
EN 14476 Testi, EUROLAB Laboratuvarında basit bir ekran olarak veya daha kapsamlı GLP çalışma koşulları altında gerçekleştirilebilir.
EN 14476 TESTİNİN ÖZETİ
- Testin başlatılmasından önce test ürünü için uygun koşullar seçilir. Ürün kategorisine ve kullanım şartlarına göre gerekli koşullar değişir.
- Test maddesi, Çalışma Sponsorunun talimatlarına göre hazırlanır.
- 0,8 ml test maddesi, 0,1 ml müdahale edici madde (test ürününün son kullanımına bağlı olarak "temiz" veya "kirli") ile desteklenir.
- % 1,4 formaldehit kontrolü hazırlanır ve test maddesiyle aynı engelleyici madde ile desteklenir.
- Test ürünü ve formaldehit kontrolü, viral süspansiyon ile aşılanır ve temas süresi boyunca tutulur.
- Test maddesine meydan okumak için kullanılan ilk viral titeri belirlemek için tamponlu salin veya hücre kültürü ortamı gibi bir inert madde kullanılarak bir virüs geri kazanım kontrolü hazırlanır.
- Temas süresinin sonunda, test ürünü ve kontroller, bir kimyasal nötrleştiriciye seyreltilerek, fiziksel bir matristen (örn. Sephacryl jel kolonları) geçerek veya bunların bir kombinasyonu yoluyla nötralize edilir.
- Nötralizasyon kontrolleri ve sitotoksisite kontrolleri, seçilen nötralizasyon yönteminin etkinliğini ve test ürününün konakçı hücreler üzerindeki etkisini belirlemek için de gerçekleştirilir.
- Test ürünü ve kontroller nötralize edildikten sonra, seri olarak seyreltilir ve permisif konak hücre tek katmanlarına kaplanır.
- Konakçı hücre testi süspansiyon sisteminin uygun süre boyunca (tipik olarak 7 gün) inkübe olmasına izin verilir.
- İnkübasyon süresinin sonunda tahlil, viral titeri ölçmek için Spearman-Karber yöntemi kullanılarak puanlanır ve gözlemlenen herhangi bir sitotoksisite buna göre not edilir.
VİRÜSİDAL ETKİNLİK BAŞARI KRİTERLERİ
- Başlangıç viral aşı, en az bir 4-günlük göstermek için test ürünü için yeterince yüksek bir titresi olmalıdır 10 azalma nispi virüs veri kontrolü.
- Testte herhangi bir sitotoksisite olması durumunda, sitotoksisite düzeyini aşan bir 4-log 10 azalma gösterilmelidir.
- Ürünün son kullanımına uygun şekilde doğru müdahale edici madde kullanılır.
- Formaldehit kontrolü, seçilen test virüsü için sınırlar içinde bir log azalması gösterir.
- Nötralizasyon kontrolleri, temas süresinin (sürelerinin) sonunda antiviral aktivitenin etkili bir şekilde kesildiğini gösterir.