Ultrasonik Kök Hücre İzolasyonu
- Ultrasonik kavitasyon insan adipoz dokusundan kök hücrelerin izole edilmesi için çok etkili mekanik bir yöntemdir.
- Ultrasonik izole stromal vasküler fraksiyonu (SVF) tıbbi uygulamalar için yüksek rejeneratif potansiyelini göstermektedir.
- Hielscher ultrason kök hücrelerinin toplanması için doğrudan ve dolaylı sonication çeşitli seçenekler sunar.
Kök Hücre Ultrasonik İzolasyon
İnsan vücudu ekstre yağ dokusundan (liposuction) üzerinden kök hücreleri ve diğer büyüme hücrelerden doku kaldırmak için ultrasonikasyon ile tedavi edilir. Bu hücre ayrılan kısmı stromal vasküler fraksiyon hücreleri (SVF) olarak da bilinir.
adipoz dokudan kök hücrelerin ultrasonik izolasyon tekniği mekanik kesme olan ultrasonik kaynaklı kavitasyon, çalışma prensibi üzerine sadece dayanmaktadır. kök hücre yağ dokusu yapısından salınacakları şekilde kavitasyonel kesme kuvvetleri, yağ dokusu bozabilir. Ultrasonik kök hücre izolasyon kolajenaz, tripsin veya dispaz kullanımından kaçınılması dolayısı ile bir enzim içermeyen bir işlemdir.
ekstre kök hücreleri, mezenkimal stem hücreleri, endotelyal ön-maddeleri ve diğer büyüme hücre tipleri ayırmak için, ses dalgası uygulanmış yağ dokusu santrifüjlenir.
ayrılmış kök hücreler toplanır ve hücre sayımı, canlılığı, endotoksin ve Gram boyama öncesi otolog transplantasyon için hemen kullanılabilir veya kriyo-depolama korunur dahil olmak üzere kalite için analiz edilir.
Neden enzimleri önlemek?
kök hücre izolasyonu için enzimatik sindirim yana yüksek maliyetler ve muhtemel güvenlik riskleri de eksik etki [Oberbauer et al eşlik eder. 2015], örneğin ultrasonik kavitasyon olarak enzimatik olmayan izolasyon yöntemleri tercih edilir. Ultrasonik izolasyon aşaması, adipoz dokudan hücrelerin mekanik olarak ve hücre agregatları ayırarak enzimatik sindirim yerini alır.
- hızlı
- verimli
- tekrar üretilebilir
- kasa
- Enzim-Free
- Uygun Maliyetli
- Steril Seçenekler
Hücre Verim Kök
1.67-2.24 x 10 ultrasonik kavitasyon oranlarını kullanarak SVF izolasyon yöntemi Yayın7 cells with a viability of 97.1–98.9% [Victor, S., 2014]. Cell yields of about 2–4 million cells/gram adipose tissue were obtained by the ultrasonic lysis of mature adipocytes in dissociated adipose tissue [Bright et al., 2014].
Ultrasonik hücreler standart enzimatik izolasyon yönteminin [Oberbauer diğerleri ile karşılaştırıldığında, eşit derecede yüksek adipojenik ve osteojenik farklılaşma potansiyeline sahip hazırlanmıştır. 2015].
Ultrasonik Sistemleri Kök Hücre İzolasyonu için
Kök hücre tedavisi kusursuz yapılmasını izin verdiği en yüksek güvenlik ve en iyi kalite, güvenilir ultrasonik ekipman, sağlamak için hastaların başarılı bir tedavi için önemli bir faktördür. Hielscher ultrason hasat sap ve endotel öncü hücreleri ve izole etmek için bir otolog ultrasonik kavitasyon ayırma işlemi için çeşitli seçenekler mevcuttur.
Doğrudan sonication
Doğrudan sonikasyon yoluyla kök hücre izolasyon işlemi için, ultrasonik korna (sonotrot, ultrasonik uç / prob) adipoz yağ dokusu içine daldırılır. Ultrasonik kavitasyon kalıntı dokusundan kök hücreler ve stromal hücreler salınması için sonotrot ile, ultrason dalgaları otolog yağ doğrudan bağlanmıştır. Hielscher ultrasonik işlemci UP200Ht ve UP200St sonotrode S26d14 ile yaygın olarak otolog kök hücre tedavisi için sistemler kullanılmaktadır. direkt sonikasyon ile SVF izolasyon temiz oda tesislerinde kullanılmak üzere çoğunlukla uygundur.
Dolaylı Sonication
kök hücreler otolog uygulamalar için kullanılan olduğundan, işlemin sterilite çok önemlidir. Bu nedenle, Hielscher gibi dolaylı sonikasyonda çeşitli seçenekler geliştirdi GDmini2, VialTweeter ve diğer sistemleri özelleştirilmiş. Dolaylı sonikasyon ile, ultrason dalgaları adipoz dokuya duvar kabın içinden kuple edilir. stromal vasküler fraksiyonu (SVF) doğrudan sonikasyon sırasında aynı şekilde ultrasonik kavitasyon ile adipoz dokudan ayrılır.
Dolaylı Sonication işlemi altında kapalı bir kap içinde hücreleri işlemek için avantajı sunuyor kirlilik içermeyen koşullar ultrason başlığın (sonotrot) sokulmasıyla çapraz kontaminasyon riski yana elimine edilir. hücre izolasyon steril işlem koşullarının sağlanması kapalı bir sistem içinde gerçekleştirilmektedir.
Hielscher dijital ultrasonik cihazlar hassas dokunmatik ekran veya tarayıcı kumandayla kontrol edilebilir. Sonication prosedürleri sezgisel menüsü aracılığıyla önceden ayarlanabilir. ultrasonik cihazlar, bir otomatik veri (bütün sonikasyon süreç verileri entegre SD-Kart saklanan) kayıt ile donatılmıştır. ultrasonik güç girişi tam hücre izolasyon protokolüne ayarlanabilir.
Edebiyat referansları
- Oberbauer, Eleni; Steffenhagen, Carolin; Wurzer, Christoph; Cebrail, Hıristiyan; Redl, Heinz; Wolbank, Susanne (2015): Yağ dokusundan elde edilen hücreler için enzimatik ve enzimatik olmayan izolasyon sistemleri: mevcut sanat durumu. Hücre Yenilenmesi (2015) 04:07.
Bilinmesi Gereken Gerçekler
kök hücreler
Kök hücre yeteneği aynı tür süresiz daha fazla hücre üretmek için gereken bir çok hücreli bir organizmanın farklılaşmamış hücrelerdir. Onlar hayatın ve büyümenin erken durumu sırasında vücutta birçok farklı hücre tipine dönüşebilirler olağanüstü potansiyeli ile karakterizedir. Kök hücrelerin en ayırt edici özelliği Özel görevli dokuya veya organa özgü hücrelerin içine çevirmek için hücre bölünmesi ve kapasiteleriyle kendilerini yenilemek için kendi yeteneği vardır. endoderm (iç mide içi, gastrointestinal sistem, akciğer), mezoderm (kas, kemik, kan, ürogenital) veya ektoderm (epidermal doku ve sinir sistemi): pluripotent kök hücreler üç germ hücreleri herhangi birine ayırt etme potansiyeline sahiptir.
Böyle bağırsak ve kemik iliği gibi bazı organlarda, hücreler düzenli onarım için bölmek ve yıpranmış veya hasar görmüş dokuları yerini kaynaklanıyor. , pankreas ve kalp gibi diğer organlarda, hücreler sadece özel koşullar altında bölmek kaynaklanıyor.
, Mezenkimal stromal / rejeneratif ve estetiği tıpta çeşitli terapötik uygulamalar için yüksek bir potansiyel sunmaktadır kök hücreler (MSC), esas olarak kemik iliğinde bulunan, ancak diğer dokulardan (örneğin kıkırdak, yağ, kas hücreleri) izole edilebilir çok. Mezenkimal kök hücreler kendini yenileme kapasitelerinin ile karakterizedir prototipi yetişkin kök hücreleri olarak kabul edilmektedir.
Kök hücre araştırma ve tedaviler nakli amaçları (doku mühendisliği) için doku ve organların yetiştirmek için kullanılır. Kök hücrelerin uygulanması için diğer ilaçlar alanlar beyin hastalığının tedavisinde bulunabilir (örneğin, Parkinson ve Alzheimer hastalığı), hücre eksikliği tedavisi, kan hastalıkları (örneğin, lösemi), eklem ve kıkırdak dejenerasyonu (örneğin osteoartrit) ve kozmetik uygulamaları (örneğin tedavileri, anti-aging). Genel olarak, kök hücreler, yaklaşık bir boyuta sahiptir. çapı 15-25 mikron.
Mezenkimal kök hücreler (MSC) çok potansiyelli stromal osteoblastlar (kemik hücreleri), kondrosit (kıkırdak hücreleri), miyositler (kas hücreleri) de dahil olmak üzere hücre tiplerinin, çeşitli içine ayırt etmek yeteneğine sahip hücreleri ve adipositler (yağ hücreleri).
Stromal Vasküler Fraksiyon (SVF)
Stromal Vasküler Fraksiyon (SVF) insan vücudunda, yağlı et dokusundan liposuction ile elde edilebilir lipoaspirate bir bileşenidir. lipoaspirate bir heterojen hücre karışımında oluşur ve bu mültilineaj hücrelere farklılaşmaları için kendi yeteneği gibi kemik iliği kök hücreleri ile benzerlik göstermektedir yağ elde edilen kök hücreleri (ASC veya ADSC) olarak bilinen kök hücre, bir yüksek seviyede ihtiva etmektedir.
SVF heterojen popülasyonu endotelyal hücreler, eritrositler, fibroblastlar, limfositler, monositler / makrofajlar ve perisitler, diğerleri arasında, hem de yağ kaynaklı kök hücrelerin önemli bir bölümünü içerir.
Yağ-Türetilmiş stromal / kök hücreler (ASC)
Yağ kaynaklı stromal / kök hücreler (ASC / ADSC), epidermal büyüme faktörü (EGF), vasküler endotelyal büyüme faktörü (VEGF), temel fibroblast büyüme faktörü (bFGF), keratinosit büyüme faktörü (KGF) gibi yüksek biyoaktif büyüme faktörleri salmaktadır. Plateletreferanslı büyüme faktörü (PDGF), hepatosit büyüme faktörü (HGF), transforme edici büyüme faktörü-beta (TGF-β), insülin büyüme faktörü (IGF) ve beyin kaynaklı nörotrofik faktör (BDNF). ACS sadece büyüme faktörlerini salmakla kalmaz, aynı zamanda fms ile ilişkili tirozin kinaz 3 (Flt-3) ligandı, granülosit koloni uyarıcı faktör (G-CSF), granülosit makrofaj-koloni uyarıcı faktör (GM-CSF), makrofaj dahil olmak üzere sitokin salgılar. -klonlu uyarıcı faktör (M-CSF), IL-6, IL-7, IL-8, IL-11 ve IL-12, lösemi inhibitör faktör (LIF) ve tümör nekroz faktörü-alfa gibi interlökin (IL) (TNF-α).
Kök Hücre Tiplerinin Ekstraksiyon
İnsanlardan gelen otolog yetişkin sayı hücreleri aşağıdaki kaynaklardan ayıklanabilir:
- kemik delme, bir toplama ile ekstre etme gerektiren Kemik iliği,.
- liposuction çıkarılmasını gerektirmektedir adipoz dokusu (lipit hücreleri).
- donörden kan geçer, burada aferez ile ekstre etme gerektiren kan, “diyaliz” kök hücreleri diğer kan bileşenlerine iken ayıklanır makine donöre geri döndürülür.