Summary
Bu protokol, erkeklerin testislerde sperm açılan ve daha sonra dişi farelerin döllemeden yöntemleri göstermektedir. Bu prosedür de transgenik çalışma olarak gelişim çalışmalarında hassas zaman gerekli olduğunda yararlıdır.
Cite this ArticleCopy Citation
Duselis, A. R., Vrana, P. B. Harvesting Sperm and Artificial Insemination of Mice. J. Vis. Exp. (3), e184, doi:10.3791/184 (2007).
Translate text to:
Please note that all translations are automatically generated.
Abstract
Cinsi Peromyscus (geyik fareler) Kemirgenler en yaygın yerli Kuzey Amerika memeliler. Peromyscus türlerin toksikoloji, epidemiyoloji, ekoloji, davranış ve genetik çalışmalar da dahil olmak üzere geniş bir yelpazede araştırma kullanılır. Burada suni tohumlama gösteriler için yararlı bir model sağlar.
Burada görüntülenir benzer yöntemler daha önce birkaç geyik Fareler üzerinde yapılan çalışmalarda, henüz herhangi bir ayrıntılı protokol yayımlanmıştır. Burada temel suni tohumlama yöntemi göstermektedir. Bu yöntem, sperm, epididim ve vas deferens izole kemirgen, sonra testis açılan gerektirir. Süt karışımı olgun sperm, yumurtlama zamanında, kadın üreme sisteminde yerleştirilir. Döllenme, embriyo gelişimi zamanlaması için her gün 0 olarak sayılır. Embriyolar sonra istenilen zaman noktasında alınan ve manipüle edilebilir.
Suni tohumlama, embriyo tam olarak elde etmek için zamanlama çok önemli ya da zor çeşitli kemirgen türleri kullanılabilir. Bu teknik, hemen ve / veya çiftleşme değerlendirmek zordur arkadaşı olmayabilir türler veya suşları (çoğu Peromyscus dahil) için hayati önem taşımaktadır. Yanı sıra, gelişim, ilerleme ve / veya transgenik çalışma eşleme ya da suni tohumlama, embriyo gelişimi için kesin zamanlama sağlar. Döllenme garanti beri hayvanların azaltılmış numaraları kullanılabilir. Bu yöntem Peromyscus sistemi sürdürmek için hayati olmuştur ve umarım aynı zamanda başkalarının yararına olacaktır.
Protocol
Suni dölleme
Suni döllenme şansını artırmak için tüm kadın hamile olduğunu doğal çiftleşmelerin yerine kullanılır. 2 erkek her 1 süperovulasyon kadın veya östrus içinde olduğu bilinen bir kadın için kullanılmıştır. Olgun erkek fareler caudae epididymides% 9 süt süspansiyon yerleştirilir ve 18 gauge iğne ile açık dilimlenmiş. Sperm birkaç dakika için serbestçe yüzmeye izin verildi ve ardından karışımı epididymides alınmıştır. Süspansiyon izdiham ve hareketli sperm mikroskop ile değerlendirildi. A künt 22 göstergesi 1 ½ inç uzunluğunda iğne sperm yönetmek için kullanılır oldu. 120 ° bend iğne aşağı 3 / 4 th hakkında yerleştirildi. 0.05mls enjekte iğne ve 0.025 bend vajina içine yerleştirildi. Asistan, uygun pozisyonda kadın tutmak için kullanılır ise, anesteziklerin kullanımı gerekli değildir.
Hazırlık
- 4 erkek 6 kadın için kullanın
- Vivaryum erkek Euthanize
- % 9 oranında süt, süt tozu yaklaşık 5 ml hazırlayın
- Küçük Petri kabındaki 1.5 ml.
- Epididymus ve vas deferens Kes
- 1.5ml% 9 sütü koyun
- Iki 18 numaralı insülin iğnesi kullanarak ve iğne ile uzun kesme hareketi kullanarak, sperm serbest epididymus ve vas deferens açmak dilim
- Doku üzerinde sol dışarı atın ve mikroskop altında sperm kontrol
Enjeksiyon
- 120 ° açıyla künt iğne kullanın.
- Eli tutun ve fare karışımı enjekte edilir. Rahatsız tutma ve enjekte bir kişi varsa, iki kişi de kullanılabilir. Bilen biri olarak bu prosedürü nasıl etkileyebileceği hiçbir anestezi kullanılmalıdır.
- Dişi başına sperm / süt karışımı kullanın 0.05ml
Alıcı kadın
- Alıcı kadın vajinal smear (bu zaman alıcı kadın proestrus / östrüs olmalıdır) yapın
- 5. Gün östrus ulaşmış değil kadınlarda muhtemelen kullanılmaktadır olmamalı
Acknowledgements
Mike kemirgen üreme Peromyscus Genetik Stok Center onun değerli bilgiler için, sabır ve bilgi Dewey teşekkür etmek istiyorum.
Materials
|Name||Type||Company||Catalog Number||Comments|
|Petri Dish||Tool||Fisher Scientific||08-772-30|
|18 gauge needle||Tool||BD Biosciences||305195|
|Powdered milk||Reagent||Any Supplier|
|1 ml syringe||Tool||National Scientific Company||S7510-1|
|Forceps||Tool||Roboz Surgical Instruments Co.||RS-5060|
|Scissors||Tool||Roboz Surgical Instruments Co.||RS-5882|
|Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline||Reagent||GIBCO, by Life Technologies||14200-075|
|22 gauge blunt needle||Tool||Give to me|