This translation into Turkish was automatically generated through Google Translate.
English Version | Other Languages
Department of Experimental Psychology, University of Oxford
Deacon, R. Assessing Burrowing, Nest Construction, and Hoarding in Mice. J. Vis. Exp. (59), e2607, doi:10.3791/2607 (2012).
"Günlük yaşam aktiviteleri (ADL) gerçekleştirmek için yeteneğinde bozulma (AD), Alzheimer hastalığının erken bir işareti. AD için olası tedaviler Preklinik davranışsal tarama şu anda büyük ölçüde bilişsel test, sık sık pahalı ekipman ve deneyci zaman çok talep üzerinde duruluyor. Ancak, insan epizodik bellek (MS bellek en ağır etkilenen yönü), büyük ölçüde olmayan epizodik görünüyor kemirgen bellek, farklı. Bu nedenle, kemirgenler AD için yeni MS tedavisi için tarama mevcut yolları, başarılı olmak özünde olası değildir. Farelerin ADL karakterize klinik öncesi tarama için yeni bir yaklaşım olacaktır. Tesadüfen, birkaç tür testlerin son Oxford'da geliştirildi, ve burada üç en hassas ve en iyi karakterize sunulmaktadır.
Sığıntı, ilk olarak Oxford 13 geliştirilmiştir. Bu bir fare istifleme paradigma geliştirmek için ihtiyaç gelişti. En yayınlamaked kemirgen istifleme paradigmalar, uzak bir besin kaynağı evde kafes bağlayan geçit ile bağlantılı olduğu gereklidir. Bu evde kafes değiştirerek yanı sıra bir fare geçirmez bağlayan geçit ve besin kaynağı içerecektir. Yani o kafesin içindeki besin kaynağı koymak mümkün olup olmayacağını kabul edildi. Bir kap zemine yerleştirilmiş olsaydı ertesi sabah tarafından boşaltılmış olduğunu tespit edildi, gıda pelet, ancak, sadece bir yığın konteyner girişinde biriken ziyade, konteyner uzak ayrı bir yere yerleştirilir. farelerin istifleme onları gerçekten olsaydı, tahmin edilebileceği gibi. Dikkat edilirse, seçilen bir yere ağızlarına pelet taşıyan fareler, ("burrowing") hareketleri kazma performanslı olduğunu gösterdi olduğu gibi eğer gerçekten istifleme. 6
Gıda pelet burrowing için önemli bir substrat değildir; fareler boş tüpleri, kum, çakıl, hatta kendi kafesi kirli yataklar dolu. Daha fazlaüzerinde, boş bir kimse bu 8 yanına bile tam bir tüp boş.
Literatürde çok sayıda yuvalama protokolleri mevcuttur. Mevcut Oxford prosedürü kolaylaştırır ve yuva kalite 5 için iyi tanımlanmış bir puanlama sistemi vardır.
Istifleme paradigma, daha sonra farelerin yerine, gerçek bir ev kafesine geri istifleme, istifleme aparatı "ana üs" yaşamaya adapte edildiği geliştirilmiştir. Bu ana üs, tel örgü, içerdiği besin kaynağı olan distal ucu yapılmış bir tüp bağlanmıştır. Bu düzenleme, iyi bir istifleme davranışı, gün boyunca farelerin "ana üs" yaşam için uyarlanmış ve sadece geceleri istifleme tüp girmek için izin gibi uzun verim olduğunu kanıtladı.
1. Sığıntı
1. Cihaz
Çeşitli konteyner tasarımları yargılandı (örneğin kolaylıkla temizlenebilir bir metal sürahi, ancak fare girmek için istekli değildi). Sonunda plastik downpipe uzunluğu (evleri oluklar bağlı) gıda pelet yanlışlıkla deplasman (kasti) önlemek için bir ucunu hafifçe yükselmiş olduğunu keşfetti ve diğer ucunda imzalandı cihazlarının verimli bir parçası oldu. Burrows artık plastik downpipe, 68 mm çap, 20 cm uzun (Şekil 1) oyulmuş yapılır. Bir ucu 12 mm ve orta yoğunlukta lif levha (MDF), bir fiş ile kapatılır. (Mdf ile çalışırken Solunum koruması tavsiye edilir). , Amaç ve su yalıtımı temizlik için su geçirmez bir yapıştırıcı mastik bileşik burrowing tüp içine tutkal bu hizmet olarak mdf, iç ve dış yüzeylerde de uygulanabilir. Makine vidaları (5 cm uzunluğunda) diğer ucunu o yükseltmek için kullanılır.f yerden tüp 3 cm. Takılı 90 ° ve vidaları bir açıyla burrowing tüpün açık ucundan 1 cm iki delik delinir ve 4 sıkılır.
Burrows çapı muhtemelen kritik öneme sahiptir; Schmid-Holmes ve ark 19 yabani farelerin özellikle boyutu yapay olanlara benzer Burrows "burrow temizlenir" olduğu görülmektedir.
Şekil 1 bir burrowing tüp içinde bir fare.
2. Prosedür
2. Beklenen sonuçlar
C57 ~ BL / 6 fareler burrow, genellikle ilk iki saat içinde yaklaşık 70 gr ve 200 gr yakıngeceleme. Hipokampal Lezyonlu fareler genellikle burrow az 5 gr 11 (Şekil 2). Prion hastalığı 1,2 burrowing inhibe lipopolisakkarid yönetiminin 20. Klinik belirtileri ise sadece 22 hafta 13 Sığıntı, hastalıklı beyin Homojenat enjeksiyondan sonra 10-12 hafta prion (scrapie) hastalığı saptayabilir. (Şekil 3). Sığıntı farklılıkları potasyum iyon kanalı alt birimden 10 15 ve knock-out suşu duyarlı olduğu gösterilmiştir.
Şekil 2, gıda kontrolü ve hipokampal Lezyonlu fareler tarafından iki saat içinde sızdılar pelet (medyan ve interquartil aralıkları) ağırlığı . Sonuncusu (p = 0.0001) kontrollere göre anlamlı derecede daha az sızdılar.
Şekil 3. Ağırlıkgıda kontrolü ve scrapie ile enfekte farelerde gecede sızdılar pelet (anlamına gelir). Haftanın 7 ila 10 enjeksiyon sonrası her iki grupta da (uygulama) artar Sığıntı, ancak hafta 12 burrowing scrapie grubundaki düşüşler ve gruplar arasındaki fark istatistiksel olarak anlamlı hale gelir (ortalamanın iki standart hataları aşan).
3. Tartışma
Sıçan, Gerbils, hamster ve Mısır dikenli fareler 8 - Biz kemirgenler diğer türler burrowing test ettik. Tüm ama ikincisi, çakıl veya kum gibi karasal yüzeyler burrow önemli miktarda uyarılan, ancak gıda pelet burrowing olabilir karasal malzemeler ile geniş bir deneyime sonra bile, daha az oldu. Farelerden elde edilen bu farkın nedeni bilinmemektedir. Bu çalışmanın yapıldığını sonra, aslında Mısır dikenli bir farelerin vahşi Burrows yapamaz olduğunu keşfetti; Burrows doğal ha yüzey Gerbils tarafından yapılan işgalbitat genellikle hard rock. Nairobi son gözlem cinsi Acomys içinde, vahşi yuva Wilson dikenli bir fare (Acomys wilsoni) ve Percival dikenli bir fare (Acomys percivali), laboratuvarda da sızdılar, gösterdi.
4. Yuvalama
1. Cihaz
Bu test bireysel kafeslerde yapılır; burrowing için kullanıldığı gibi aynı olanlar uygundur. Normal yataklar 0.5 cm derinlikte zemin kapsamalıdır. (Varyasyon, derinlemesine ve çok derin yataklar, yuva inşaatı etkileyebilecek). Her kafes "Nestlet", preslenmiş pamuk vuruş (Ancare) 5 cm kare ile verilir.
2. Prosedür
Fareler karanlık evre önce yaklaşık bir saat yuvalama kafesler içine tek tek yerleştirilir ve ertesi sabah değerlendirilir. Burrowing ile ve benzeri nedenlerle, zamanlama kritik değildir.
3.Puanlama
Yuvaları 5 puanlık bir ölçek (Şekil 4-8) değerlendirilir ve untorn Nestlet miktarı da 5 tartılır.
Nerede kriterler fark bölmek aynı fikirde değilim. Örneğin unshredded 0.7g bir parça ile mükemmel bir yuva 4.5 puan olacak.
Şekil 4. Nest 1 puan
Şekil 5.. Nest skoru 2
Şekil 6.. Nest skoru 3
Şekil 7 Nest puan 4
Şekil 8 Nest puanlıE 5
4. Beklenen sonuçlar
Onların amacı termoregülasyon yanı sıra üreme ile ilişkili olarak kadın ve erkeklerde, yuva yapmak. C57BL / 6 fareler için, biz tek bir deneyde kontrollü bir karşılaştırma yapmadı olmasına rağmen erkekler ve kadınlar için yuva puanları, aynı aralıkta. En C57BL / 6 fareler yuva inşaat 4-5 puan, ancak hipokampus Lezyonlu olduğunda ortanca skoru 1-2 civarında olacağını; 3 puan olası değildir (Şekil 9) aşılmamalıdır. Yuvalama ayrıca yaklaşık 10-12 hafta 1,2,16 prion hastalığı duyarlı olduğunu kanıtladı.
Şekil 9 kontrol fareler ve dorsal, ventral ve tam hipokampus lezyonu olan fareler Nest puanları (medyan ve interquartil aralıkları). Sadece tam Lezyonlu farelerin iç içe inhibisyonu, bu nedenle selektif dorsal ve ventr etkilerial bölgelerin alt eşik ama katkı görünür.
5. Istifleme
1. Cihaz
"Bir dizi" ev üsleri, tel örgü yapılmış tüplere bağlı, gıda pelet yerleştirilen distal ucunda ve geçici olarak ahşap bir fişi proksimal sonunda kalıcı kapatılmış. Bu ana üs uyum occurred7 önce tüpler giren fareler önlemek için kullanılır.
(Şekil 10) Cihaz temel ilkelerine uyulduğu sürece, çeşitli yollarla yapılabilir. Bizimki 8 ahşap kutular bir satır oluşuyor, her biri 30 x 13 x 15 cm şeffaf pleksiglas kapaklı. Her bir su şişesi ile birlikte, istifleme tüp push-donatılmış içine arkasında bir delik vardır. Tüpler, 10 cm uzunluğunda siyah plastik, 40 mm çapında, 50 cm, toplam uzunluğu oluşturmak için, 45 cm uzunluğunda bir tel örgü tüp, 4 cm çapında katıldı. Örgü, 13 mm kareler oluşur.ve küçük kafes delikleri ve gıda pelet yoluyla bırakarak önlemek için yanlış sıralanmış kafes ile bir çift rulo. 6 mm kare örgü varsa bu bir rulo yeterli olacağı gibi daha iyi bir malzemedir. Gıda pelet yerleştirilen tüp, distal ucu kapatılmış. Proksimal ucu çıkarılabilir bir ahşap fişi ile mühürlenir.
Istifleme tüpler Şekil 10 Fare.
2. Prosedür
6. Beklenen sonuçlar
Kadın C57BL / 6 farelerin kullanarak, stoklandı medyan miktarı etrafında olurdu50-70 g. Prefrontal korteks lezyonları sadece zayıf bir etkisi 12 (Şekil 11) ise hipokampal lezyonlar kuvvetle bastırmak, hoarding11.
Şekil 11 gıda pelet Kilo kontrolü ve medial prefrontal korteks Lezyonlu fareler (medyan ve interquartil aralıkları) stoklandı. Medyan oldukça farklı olmasına rağmen, kontrol grubunda yüksek değişkenliği sonuç (P = 0.3) istatistiksel olarak anlamlı olmaktan uzaktır anlamına gelir.
Bu testleri çalıştırmak için son derece basit ama etkisi boyutları çok büyük, Russel ve Burch 3 Rs "18" Sadeleştirme "yönü uygun tedaviler, gerilme farklılıkları, vb onları son derece duyarlı hale. Gerçekten de, burrowing gibi testlerde iyi performans hayvanların genel sağlık durumu iyi göstergesi gibi görünüyor. Bu nedenle bu hayvan refahı değerlendirilmesi için iyi bir test olabilir.
Laboratuvar kemirgenler için çevre zenginleştirme önemi bu gün kabul edilmektedir. Yuvalama malzeme temini, çok sayıda hayvan barınağı artık standart bir uygulama olduğunu ve bunu yapmak kolaydır. Coşku ile fareler burrow bir potansiyel mükemmel zenginleştirme, ama ne yazık ki bu henüz geliştirilmiş değil sağlayan pratik bir yolu olacaktır "self-yeniden yükleme" burrow burrowing yapar. Fareler bulmak ister istifleme zenginleştirici henüz tespit edilmiştir değil._content "> Bir dezavantajı bu testler tarafından oluşturulan veriler genellikle non-parametrik (Gauss dağılım) olduğunu, bu nedenle uygun non-parametrik istatistikler, örneğin ikili karşılaştırmalar Mann-Whitney U testi, bunları analiz için gerekli olan Kruskal- çok grup veri Wallis ANOVA tekrarlayan ölçümler tasarımları, non-parametrik veriler için hiç uygun ANOVA testi olmadığından kullanılması durumunda, sonuçları örneğin karekök veya günlük prosedürleri onlara daha normal bir dağılım uygun yapmak için, dönüştürülecek. .
Cihazların ölçümleri biraz metin belirtilenlerden farklı (ABD deneyciler için yararlı), ancak geniş farklar kaçınılmalıdır. Ancak, bazı durumlarda diğer deneyciler, burada açıklanan dışında farklı yapılar daha iyi çalışmasını bulabilirsiniz.
Tüm davranışsal ölçümleri için gibi, farelerin aktivite düzeyleri normal olup olmadığını, hareketsizlik gibi açıkça bir detrim olacak görmek için test edilmelidirental türlerin tipik davranışları üzerindeki etkisi. Scrapie ile enfekte farelerde engelli burrowing ve yuvalama gösteren, aktivite düzeyleri (açık alan aparatı test) normal idi. Gerçekten de, hiperaktivite bir dönem bu türün tipik davranışlar ilk 2 engelli yaklaşık 2-4 hafta sonra ortaya çıkar.
Burrowing hipokampal lezyonları tarafından üretilen güçlü bir bozulma, yerleştirme ve istifleme, tüm bu türün tipik davranışlar, bu lezyonların gibi köklü etkileri uzamsal öğrenme ve memory9 bozuklukları tamamlar. Bu karakteristik MS 14 günlük yaşam faaliyetlerine bozuklukları eşdeğer gibi görünüyor.
Bu türlerin tipik testleri de preklinik tarama, Alzheimer ve diğer nörodejeneratif hastalıklar 14 tedaviler için büyük bir kullanım olarak karşımıza çıkabilir . Birçok insan beyin bozuklukları kaybı veya azaltılmış yeteneği normal arifesinde gerçekleştirmekryday görevleri kognitif bozukluk gibi hastalığın diğer özellikleri kadar önemlidir. Özellikle, bu kayıp, bakıcılar ve bu yüzden sık sık empoze büyük sosyo-ekonomik yük katılımı gerekebilir.
Çıkar çatışması ilan etti.
Oxford Üniversitesi Açık Erişim finansman sağlamak için Wellcome Trust. Robert Deacon, Wellcome Trust hibe WT084655MA tarafından finanse edilen Oxford OXION grubunun bir üyesidir.