Yüksek doğruluk gerektiren deneylerde laboratuvardaki küçük sıvı miktarlarını kesin olarak ölçmek ve aktarmak için bir pipet kullanılır. Bununla birlikte, pipet ölçümlerindeki hata kaynakları, cihaz arızasından veya operatör tarafından yanlış kullanımdan kaynaklanabilir. Dağıtılan hacimlerde herhangi bir tutarsızlık, qPCR sonuçları gibi bir deneyin sonucunu ve tekrarlanabilirliğini etkileyebilir. Bu nedenle, doğru miktarların dağıtılmasıyla doğruluğun sağlanması için pipet kalibrasyonunun birkaç ayda bir kontrol edilmesi gereklidir. Bu yüzden pipet kalibrasyonu iyi laboratuvar uygulamasının (GLP) temel bir parçası olarak kabul edilir.
Pipet Kalibrasyonunun Prensipleri
20 ° C sıcaklıkta ve bir atmosfer basıncında, su yoğunluğu 1 g / mL’de sabit kalır. Su hacmi, tartılmış su ile tartılarak belirlenebilir. Sıcaklık, atmosferik basınç ve nem, ölçümlerin doğruluğunu etkileyebilir. Bu faktörler, su hacminin hesaplanmasında uygulanan Z faktörünü oluşturmak için birleştirilir ve son olarak pipetin doğruluğunu belirleyen teorik hacimle karşılaştırılır.
|Sıcaklık (° C)||Z faktörü|
|20||1,0029|
|21||1,0031|
|22||1,0033|
|23||1,0035|
|24||1,0037|
|25||1,0039|
1 atm basınçta damıtılmış su için Z faktörlerinin pipet kalibrasyon tablosu
Pipet Kalibrasyonunda Yer Alan Adımlar
- Bir beherde damıtılmış suyu alın ve sıcaklığını kaydedin. Ayrıca pipetinizi ve pipetlerin dağıtabileceği küçük ve büyük hacimlere göre doğrulayarak toplayın.
- Bir tartım teknesini, mikrogram aralığında doğru bir şekilde tartabilen ve denge kapağını kapattıktan sonra sıfıra ayarlayabilecek bir denge yerleştirin.
- Önceden ayarlanan hacmi üç kez aspire ederek ve dağıtarak ön durulayın ve kalan sıvıyı çıkarmak için tamamen itin.
- Kalibrasyon hacmini kabarcık oluşumu olmadan aspire edin ve sıvıyı yavaşça tartım teknesine dağıtın. Daha sonra, ağırlığı dengeye kaydedin ve işlemi on kez tekrarlayın.
- V = W x Z denklemini kullanarak dağıtılan hacmi hesaplayın. Burada W, suyun ağırlığıdır, Z Z faktörüdür ve V, dağıtılan suyun hesaplanan hacmidir. Ardından, on denemeden ortalama değeri belirleyin.
- Son olarak, A = 100 x V avg / V 0 denklemini kullanarak doğruluğu hesaplayın , burada A pipet doğruluğu, V avg ortalama hesaplanan hacimdir ve V 0 dağıtmaya çalıştığınız teorik hacimdir. Doğruluk değeri% 99-101 aralığındaysa, pipet normal kabul edilir ve kalibre edilir.
Dikkat
Test ortamındaki sıcaklık, nem ve atmosferik basınç gibi büyük değişiklikler, kalibrasyon sırasında buharlaşmayı etkileyebilir, bu da sonuçta güvenilir olmayan bir teste neden olabilir. Kalibrasyona başlamadan önce pipetleri kalibrasyon ortamına bir saatten fazla ayarlamak da önemlidir. Son olarak, eğer pipet kalibrasyon testini geçmezse ve kalibrasyonu kendiniz düzeltemiyorsanız, servis için ayarlayınız.