Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Yüzme-induced felci veya SWIP tahlilini yapmak için, L4 sahnelenmiş C. elegans larvalarını sıvı dolu bir cam spot plakaya aktarın. L4 hermafroditlerini gelişen vulvanın varlığıyla tanımlayın. Vücudun orta noktasında yarım ay şeklinde bir yama ve kırbaç benzeri bir kuyruk.
Dopamin aracılı yüzmeyi değerlendirmek için, solucanın C şeklindeki vücut bükme ve hırpalama davranışı ile karakterize hareketini kaydedin. Genellikle, dopaminerjik nöronlar sinaptik yarığa dopamin salgılar ve bu da alıcı hücreye dopamin reseptörlerini bağlar.
Mesaj iletildikten sonra, dopamin reseptörlerden salınır ve ilişkisiz nörotransmitterler dopaminerjik nöron tarafından özel taşıyıcı proteinler aracılığıyla alınabilir ve yeniden kullanılabilir.
Dopamin taşıyıcısındaki mutasyonların inaktive olması veya dopamin salınımını artıran ilaç tedavilerinin neden olduğu değiştirilmiş dopamin sinyaline sahip larvalarda, dopamin sinaptik yarıkta birikir. Aşırı dopamin, dopamin reseptörlerinin motor programına müdahale etmesini ve larvaları felç etmesini uyarır. Hareket edemeyen larvalar plakanın dibine batar.
Örnek protokolde, amfetamin ile tedavi edilen C. eleganlarda manuel ve otomatik SWIP testlerinin ayrıntılı gösterilerini göreceğiz.
- SWIP'in manuel olarak değerlendirilmesi için, cam spot plakaya 0,5 milimolar amfetaminli veya 40 milimolar amfetaminsiz 40 mikrolitre kontrol çözeltisi ekleyin. Stereoskop altında, kirpik çekerek 8 ila 10 geç L4 sahne solucanı seçin ve solucanlar kazmadan uzaklaşıp çözeltiye yüzene kadar çözeltiyi içeren kuyuya batırın.
Zamanlayıcıyı başlatın. Kuyuya salınan solucan sayısını not edin ve toplam 10 dakika boyunca her dakika işarette SWIP sergileyen solucanların sayısını gözlemleyin ve kaydedin.
İşlemin sonunda, ham verileri bir elektronik tabloya kopyalayın ve her dakika felç olan solucan sayısını test boyunca test edilen toplam solucan sayısına bölerek ve 100 ile çarparak felç olan solucanların yüzdesini hesaplayın.
Kontrol ve amfetamin ile tedavi edilen gruplar arasında istatistiksel analiz ve tedavi süresi yapılabilir. Örneğin, iki yönlü ANOVA ve post hoc analizi kullanılarak.
Yüzme kaynaklı felcin otomatik analizi için kamerayı, solucan izleyici yazılımını ve komut dosyasını izleme yazılımı analizini çalıştırmak üzere ayarlayın.
Ardından, aynı anda bir solucanın yüzme videolarını kaydedin ve vücut bükülmelerinin sıklığını hesaplamak için solucan izleyici yazılımını kullanın. Solucan kırbaçlama frekansını elde etmek ve solucan kırbaçlama verilerinden ısı haritaları oluşturmak için izleme yazılımı ile sağlanan komut dosyasını takip edin.