Deneyin başlamasından önce, test maddesindeki aktif bileşen ölçülür, pH alınır ve titrasyon analizi kullanılarak test maddesinin konsantrasyonu doğrulanır. Daha sonra test maddesi önerilen minimum konsantrasyona (MRC) seyreltilir ve titrasyon analizi ile tekrar onaylanır ve son bir pH alınır.
Çalışmanın başlamasından önce, test kültürü (genellikle Mycobacterium terrae) 21-25 gün uygun agar yatıklarında büyütülür, 28-35 gün boyunca et suyu içinde yeniden süspanse edilir, kültür homojenleştirilir, buzağı serumu ile desteklenir ve uygun aşı konsantrasyonu. Bu çalışmanın değerlendirilmesinde genellikle TEE probları kullanılır. Problar sterilize edilir ve testten sonra 20 dakika içinde hazırlanır.
Bu çalışmada, nötrleştirici geri kazanım ortamına batırılmış steril bir pamuklu çubuk kullanılarak bir negatif kontrol çalıştırılır, daha sonra yüzey alanlarının her birini temizlemek için kullanılır. Eküvyon daha sonra kesilecek ve 10 ml geri kazanım ortamında bırakılacak, vortekslenecek, içerik filtrelenecek, ardından filtre inkübasyon süresi için OADC katkısı ile desteklenen M7H9 agar üzerine kaplanacaktır.
Test mikropunun bir bölüntüsü ile aşılanan test probları 30 dakikadan fazla kurumaya bırakılır. Deneyin geri kazanım aşaması, aşılanmış ve kurutulmuş yüzey alanını fırçalamak için nötrleştirici geri kazanım ortamına batırılmış bir çubukla kullanılan negatif kontrole çok benzer. Swablar daha sonra 10 ml kurtarma medyası halinde kesilir. Bu, test edilen probun her yerinde tekrarlanır.
Çalışmanın yanında, bir sondanın üç yüzey bölgesinin yaklaşık 100 CFU / 10ml ile aşılandığı yerde düşük sayı kontrolü de yapılır. Yüzey kuruduktan sonra, üç bölge önceden olduğu gibi alınır, vortekslenir, bir filtreden geçirilir, plakalanır ve ardından 12-14 gün inkübe edilir. Bu düşük sayı kontrolü, düşük bir inokülum konsantrasyonunda bile mikrobun sondadan geri kazanılabileceğini göstermeye yardımcı olur.