We are searching data for your request:
Upon completion, a link will appear to access the found materials.
hakkında çok basit bir sorum var Naegleria kuşları amip. Bazı uzmanlar suyu 15 dakika kaynatmanın öldürdüğünü iddia ediyor Naegleria. Ancak, bir yerde okudum ki Naegleria çevre veya atmosfer kendini korumak için sertleştiğinde kist formlarına dönüşebilir. Yani soru şu ki bunun için mümkün mü Naegleria su, kist formuna dönüşerek 15 dakika 100 derecede kaynatılırsa ve insanın burnuna girip insanı öldürürse kaynama sıcaklığında hayatta kalabilmek için mi?
öyle bir yerde okudum ki Naegleria çevre veya atmosfer kendini korumak için sertleştiğinde kist formlarına dönüşebilir.
Bu doğrudur ve aşırı sıcaklık (sıcak veya soğuk), yiyecek eksikliği ve aşırı kalabalık dahil olmak üzere birçok nedenden dolayı olabilir.
için mümkün mü Naegleria su, kist formuna dönüşerek 15 dakika 100 derecede kaynatılırsa ve insanın burnuna girip insanı öldürürse kaynama sıcaklığında hayatta kalabilmek için mi?
Kısacası: hayır, bu mümkün değil. Çevresel Araştırma Merkezi ve ABD Çevre Koruma Ajansı tarafından yapılan bir yayına göre:
51, 55, 58, 63 ve 65 °C'de, Naegleria sırasıyla yaklaşık 30, 10, 5, 1 ve <0.5 dakika hayatta kaldı.
Bununla birlikte, sadece yayındaki rakamlardan yola çıkarak, bunun hiç şansı yok. Naegleria 100°C kaynar suda 15 dakika yaşayabilir.
Bir Su Parkından Beyin Yiyen Amip Aldıktan Sonra Bir Adam Öldü: Bilmeniz Gerekenler
Kuzey Carolina'daki bir su parkını ziyaret ettikten haftalar sonra, bir adam beyin yiyen bir amipten öldü ve insanları popüler yaz etkinliğinin güvenliğini sorgulamaya yöneltti.
Eddie Gray, 12 Temmuz'u kilise misyon grubuyla birlikte Kuzey Karolina, Cumberland County'deki Fantasy Lake su parkında geçirdi. Kuzey Carolina sağlık yetkilileri, yazları ılık tatlı suda doğal olarak bulunan bir amip olan Naegleria fowleri'yi insan yapımı gölde kaptığına inanıyor.
Beyin yiyen amip vakaları son derece nadir görülürken, Amerika Birleşik Devletleri'nde her yıl milyonlarca yüzücü suya akın ediyor, sadece 0 ila 8 kişi bu hastalığa yakalanıyor. Ancak su parkına gitmeden önce, güvende olmak için bilmeniz gerekenler burada.
Beyin yiyen amip tam olarak nedir?
Yaygın olarak beyin yiyen amip olarak adlandırılan Naegleria fowleri, primer amip meningoensefalit (PAM) adı verilen nadir ve neredeyse her zaman ölümcül bir beyin enfeksiyonuna neden olabilen tek hücreli bir canlı organizmadır. Hastalık Kontrol Merkezlerinden alınan bir rapora göre, 1962'den 2015'e kadar ABD'deki 138 kişiden sadece üçü enfeksiyondan sağ kurtuldu.
Nerede yaşıyor?
Beyin yiyen amip en çok göller, nehirler ve kaplıcalar gibi ılık tatlı sularda bulunur. Ayrıca, kötü bakımlı veya minimum düzeyde klorlu yüzme havuzlarında bulunur ve bakterilerle beslenmek için bu habitatlarda kalır.
Orange County'deki Florida Sağlık Bakanlığı sözcüsü Mirna Chamorro daha önce PEOPLE'a verdiği demeçte, amip doğal olarak meydana geliyor, bu nedenle herhangi bir tatlı su kütlesinde bulunabilir.
Amip kaynaklı enfeksiyonların çoğu, CDC'ye göre tüm enfeksiyonların yarısından fazlası Teksas ve Florida'da meydana gelmekle birlikte, güney katman eyaletlerinde meydana geldi. Naegleria tuzlu suda bulunmaz.
İnsanlar nasıl sözleşme yapar?
Amipi yüzerken sadece suyu yutarak alamazsınız, ancak Kuzey Karolina Departmanına göre dalış, su kayağı veya diğer su aktiviteleri sırasında meydana gelebileceği gibi burnunuzu yukarı zorlarsanız ölümcül olabilir. Sağlık ve İnsan Hizmetleri Bölümü.
İLGİLİ VİDEO: Beyin Yiyen Amip Naegleria Fowleri Hakkında Bilmeniz Gerekenler
Sahip olup olmadığımı nasıl anlarım?
CDC'ye göre, beyin yiyen amip semptomları genellikle buruna maruz kaldıktan bir ila dokuz gün sonra başlar ve birçok insan semptomları gösterdikten sonra 18 gün içinde ölür. İlk aşamada şiddetli baş ağrıları, ateş, mide bulantısı ve kusma, ikinci aşamada boyun tutulması, nöbetler, mental durum değişikliği, halüsinasyonlar ve koma bunlar arasındadır. Ne yazık ki, amipin neden olduğu enfeksiyon olan PAM, hastalığın hızlı ilerlemesi nedeniyle nihayetinde tespit edilmesi zordur. Tanı genellikle ölümden sonra yapılır.
Yetkililer su kütlelerinde amip testi yapıyor mu?
Chamorro, CDC'nin beyin yiyen amip için su kütlelerinin test edilmesini önermediğini, çünkü bu doğal olarak meydana geldiğini ve bunun anlamı, naegleria fowleri'nin saptanması veya konsantrasyonu ile enfeksiyon riski arasında yerleşik bir ilişki olmadığı anlamına geliyor.
Suyu test etmek, insanlara bir su kütlesinde yüzmeden önce bilinçli bir karar vermeleri için ihtiyaç duydukları tüm bilgileri vermez.
Yanlış bir güvenlik duygusu verebilir, dedi. Bir gölün bir tarafında amip olabilir, diğer tarafında değil. Sedimentte de bulunabilir.
Amiple ilgili uyarı işaretleri genellikle bu nedenle su kütlelerinin yakınına yerleştirilmez.
Amipten korunmak için ne yapabilirim?
Enfeksiyon nadir olmasına rağmen, şu anda sudaki amip sayısını azaltacak bir yöntem yoktur. CDC, web sitesinde, bu nedenle, insan sağlığını korumak için bir standardın nasıl belirlenebileceğinin ve halk sağlığı yetkililerinin böyle bir standardı nasıl ölçüp uygulayacağının net olmadığını söylüyor.
Beyin yiyen bir amip enfeksiyonunu önlemenin tek garantili yolu, ılık tatlı suda suyla ilgili faaliyetlere katılmaktan kaçınmaktır. Chamorro, 𠇋ir su kütlesinde vakit geçirmekten hoşlanan herkesin içeri girmeden veya burun klipsi kullanmadan önce burnunu kapatması gerektiğini söylüyor. Kafalarını suya sokmadıkları sürece sorun yok.
Serbest Yaşayan Amip Enfeksiyonları
Cinsine ait serbest yaşayan amipler Acanthamoeba, Balamutya, Naegleria ve Sappinya insanlarda ve hayvanlarda nadir görülen hastalık nedenleridir.
Acanthamoeba spp. ve Balamuthia mandrillaris granülomatöz amip ensefalite (GAE) neden olabilen serbest yaşayan amiplerdir. Acanthamoeba kontakt lens kullanıcıları arasında ciddi keratitin önemli bir nedenidir ve ayrıca özellikle bağışıklığı baskılanmış kişilerde kutanöz lezyonlara neden olabilir. Çünkü tür düzeyinde tanımlama tipik olarak Acanthamoeba durumlarda, cins içindeki patojenik türlerin tam aralığı bilinmemektedir, ancak insanları enfekte ettiği bilinen türler şunları içerir: A. byersi, A. castellanii, A. culbertsoni, A. hatchetti, A. healyi, A. astroonyxix, A. divionensis ve A. polifaga. B. mandrillaris cilt lezyonları ile birlikte de ortaya çıkabilir. Naegleria kuşları primer amebik meningoensefalit (PAM) adı verilen akut ve genellikle ölümcül bir merkezi sinir sistemi (CNS) hastalığı üretir. Sappinya pedatası bir insan amebik ensefalit vakasında yer almıştır.
Yaşam döngüsü
Acanthamoeba spp.
Acanthamoeba spp. çevrede her yerde bulunur ve taze toprak, acı su ve deniz suyu da dahil olmak üzere çeşitli alanlarda bulunmuştur. Tarlada yetişen sebzeler kanalizasyon yüzme havuzları kontakt lens malzemeleri tıbbi havuzlar diş tedavi üniteleri diyaliz makineleri ısıtma, havalandırma ve klima sistemleri ve musluk suyu memeli hücre kültürleri ve sebzeler. Acanthamoeba iki aşamalı kistleri vardır ve trofozoitler yaşam döngüsündedir ve kamçılı bir aşamadan yoksundur. Trofozoitler mitozla çoğalır (nükleer zar sağlam kalmaz) . Trofozoitler enfektif formlardır, ancak hem kistler hem de trofozoitler vücuda girebilir. çeşitli yollarla. Giriş göz yoluyla gerçekleşebilir , alt solunum yollarına giden burun pasajları veya ülsere veya kırık cilt . Ne zaman Acanthamoeba spp. göze girerse sağlıklı kişilerde, özellikle kontakt lens kullanıcılarında ciddi keratite neden olabilir . Solunum sistemine veya deri yoluyla girdiğinde hematojen yayılım ile merkezi sinir sistemini invaze ederek granülomatöz amibik ensefalite (GAE) neden olabilir. veya yaygın hastalık veya cilt lezyonları bağışıklık sistemi zayıf olan kişilerde. Her ikisi de Acanthamoeba spp. dokuda kistler ve trofozoitler bulunur.
Balamuthia mandrillaris
Balamuthia mandrillaris toprak ve tozdan ve ayrıca enfekte olmuş insan ve hayvanların otopsi örneklerinden izole edilmiştir. B. mandrillaris iki evresi vardır, kist ve trofozoitler yaşam döngüsündedir ve kamçılı bir aşamadan yoksundur. Trofozoitler mitozla çoğalır (nükleer zar sağlam kalmaz) . Trofozoitler, hem kistlerin hem de trofozoitlerin vücuda girmesine rağmen, enfektif formlardır. çeşitli yollarla. Burun pasajlarından alt solunum yollarına giriş olabilir. veya ülserli veya kırık cilt . Ne zaman B. mandrillaris solunum sistemine veya deri yoluyla girerse, granülomatöz amebik ensefalite (GAE) neden olan hematojen yayılım yoluyla merkezi sinir sistemini istila edebilir. veya yaygın hastalık veya cilt lezyonları . B. mandrillaris dokuda kistler ve trofozoitler bulunur, birkaç vaka enfekte bir donörden katı organ nakli ile ilişkilendirilmiştir.
Naegleria kuşları
Naegleria kuşları yaşam döngüsünde üç aşama vardır: kistler , trofozoitler ve kamçılı formlar . Trofozoitler promitoz ile çoğalır (nükleer membran bozulmadan kalır) . N. fowleri tatlı su, toprak, enerji santrallerinin termal deşarjları, jeotermal kuyular ve zayıf klorlu eğlence ve musluk suyunda bulunur. Trofozoitler, genellikle trofozoit aşamasına geri dönen geçici, beslenmeyen kamçılı formlara dönüşebilir. Trofozoitler, genellikle yüzme veya sinüs irrigasyonu sırasında nazal mukozaya nüfuz ederek insanları veya hayvanları enfekte eder. ve beyne göç koku alma sinirleri yoluyla primer amebik meningoensefalite (PAM) neden olur. Naegleria kuşları trofozoitler beyin omurilik sıvısı (BOS) ve dokuda bulunurken, kamçılı formlar bazen BOS'ta bulunur. Beyin dokusunda kist görülmez.
Ana bilgisayarlar
Bu amip türleri çevrede serbest yaşadıklarından ve yalnızca fırsatçı parazitik olduklarından büyük bir rezervuar konakçısı yoktur. Bununla birlikte, bu tür enfeksiyonlar çeşitli hayvan türlerinde belgelenmiştir.
Coğrafi dağılım
Bu amipler, dünya çapında su ve toprakta meydana gelir ve aşağıda insan enfeksiyonlarının meydana geldiği bilinen yerlerin bir özeti verilmiştir:
Acanthamoebaspp.: Acanthamoeba-ilişkili keratit, dünya çapında ağırlıklı olarak kontakt lens kullanıcıları arasında görülür. Vakalar Acanthamoeba-ilişkili GAE de geniş olarak rapor edilmiştir.
Balamuthia mandrillaris: Raporları B. mandrillaris enfeksiyonlar öncelikle Amerika, özellikle Latin Amerika kaynaklı olup, Asya, Avustralya ve Avrupa'dan sınırlı vaka bildirilmiştir. Amerika Birleşik Devletleri'nde, güneybatı eyaletlerinden birçok vaka bildirilmiştir. Peru'dan bildirilen birçok vaka, yüzdeki cilt lezyonlarının gelişimini içermektedir.
Naegleria fowleri: Yaşadığı tüm kıtalarda vakalar bildirilmiştir. Amerika Birleşik Devletleri'ndeki çoğu vaka, güney eyaletlerinde ılık tatlı suya maruz kalma ile ilişkilendirilmiştir. Bununla birlikte, yaz aylarında kuzey eyaletlerinden bildirilen vakalar olmuştur.
ile bildirilen tek enfeksiyon vakası Sappinya pedatası Teksas'ta bir insanda tespit edildi.
Klinik sunum
Acanthamoeba spp.: Yaygın enfeksiyon tipik olarak akciğerlerin veya sinüslerin iltihaplanması ve/veya cilt enfeksiyonları olarak ortaya çıkar ancak beyne yayılma potansiyeli vardır. GAE, haftalar ila aylar arasında giderek kötüleşen kronik bir başlangıca sahiptir. Belirti ve semptomlar meningoensefalit ve ensefalit için tipiktir ve değişen derecelerde nörolojik bozukluğu içerir. GAE'den kurtulan çok az kişi var.
Acanthamoeba keratit en sık tek taraflıdır ve bireysel oküler semptomlar değişkendir. İriste karakteristik dairesel stromal infiltrat belirgin hale gelebilir. Tedavi edilmezse kornea ülseri ve yara izi oluşabilir. Kontakt lens kullanımı ile yüksek oranda ilişkili olmasına rağmen, kontakt lenslerin yokluğunda meydana gelen vakalar meydana gelmiştir.
Kutanöz akanhamebiasis, en yaygın olarak kabuklu veya ülsere olan, tek veya yaygın kronik cilt lezyonları olarak ortaya çıkar, sertleşmiş veya eskarı olabilir. Deri enfeksiyonlarının neden olduğu Acanthamoeba ciltte kırmızımsı nodüller, cilt ülserleri veya apseler olarak görünebilir. Lezyonlar mantar veya mikobakteriyel deri enfeksiyonu, aşağıdakilerin neden olduğu kutanöz amebiyaz ile karıştırılabilir. Entamoeba histolytica veya kutanöz leishmaniasis. Bunlar, eşzamanlı merkezi sinir sistemi hastalığı ile birlikte veya bunlar olmadan ortaya çıkabilir.
Balamuthia mandrillaris: ile enfeksiyon B. mandrillaris benzer bir kurs içerir Acanthamoeba-ilişkili GAE. Hastalık ilk başta hafif görünebilir, ancak haftalar ila birkaç ay içinde daha şiddetli hale gelebilir. Genellikle hastalık ölümcüldür ve vaka ölüm oranı %89'dan fazladır. Çoğunlukla yüzde, özellikle yanak veya burun bölgesinde, ancak bazen gövde veya uzuvlarda plak benzeri cilt lezyonları, nörolojik semptomların gelişiminden haftalar veya aylar önce olabilir.
Naegleria fowleri: PAM, hemorajik-nekrotizan meningoensefalitin neden olduğu hızlı dejenerasyonla birlikte ciddi CNS disfonksiyonu ile karakterizedir. GAE'den farklı olarak, PAM semptomlarının başlangıcı, enfeksiyonu takiben hızlı bir şekilde ortaya çıkar (yüzme veya diğer nazal maruziyetten sonra 1-9 gün medyan 5 gün). Naegleria-su içeren). Semptomlar, nörolojik fonksiyon ve komplikasyonların bozulmasıyla sıklıkla karıştırıldığı bakteriyel menenjite benzer. Vaka ölüm oranı son derece yüksektir.
Acanthamoeba spp. kistler.
kistleri Acanthamoeba spp. tipik olarak 10&mdash25 µm çapındadır. Kistler gözenekli iki katmanlı bir duvara sahiptir: buruşuk bir fibröz dış duvar (ekzokist) ve altıgen, küresel, yıldız şeklinde veya çokgen olabilen bir iç duvar (endokist). Kistler, büyük bir karyozomlu sadece bir çekirdek içerir. Kistler beyinde, gözlerde, deride, akciğerlerde ve diğer organlarda bulunabilir.
Acanthamoeba spp. trofozoitler.
Trofozoitleri Acanthamoeba spp. pleomorfiktir ve yaklaşık olarak 15&mdash45 µm ölçülerindedir. Genellikle acanthapodia adı verilen çoklu omurga benzeri süreçlere sahiptirler. Trofozoitler, büyük, merkezi olarak yerleştirilmiş bir karyozomlu, ancak çevresel kromatin içermeyen büyük bir çekirdek içerir. kamçılı trofozoit evresi yoktur. Acanthamoeba spp.
Balamuthia mandrillaris kistler.
kistleri Balamuthia mandrillaris morfolojik olarak oldukça benzerdir. Acanthamoeba spp. ve ayrıca tipik olarak 10&mdash25 µm (ortalama 15 µm) çapındadır. Genellikle bunlar güvenilir bir şekilde ayırt edilemez. Acanthamoeba spp. moleküler doğrulama veya elektron mikroskobu olmadan. Kistlerin ışık mikroskobunda görünen iki duvarı vardır ve gözenekleri yoktur: buruşuk bir fibröz dış duvar (ekzokist) ve şekil olarak değişken olabilen bir iç duvar (endokist). Üçüncü bir katman (mezosist) sadece elektron mikroskobu ile görülebilir. Kistler, büyük bir karyozomlu sadece bir çekirdek içerir. Kistler beyinde, deride, akciğerlerde ve diğer organlarda bulunabilir.
Balamuthia mandrillaris trofozoitler.
Trofozoitleri Balamuthia mandrillaris pleomorfiktir ve yaklaşık 15&mdash60 µm ölçer. Genellikle uzun psödopodia üretirler (kilerden daha geniştir). Acanthamoeba spp.). Trofozoitler, büyük, merkezi olarak yerleştirilmiş bir karyozomlu, ancak çevresel kromatin içermeyen büyük bir çekirdek içerir. Binükleat formları nadirdir. kamçılı trofozoit evresi yoktur. B. mandrillaris.
Naegleria kuşları kistler.
Naegleria kuşları insan dokusunda kist oluşturmaz. Ortamdaki ve kültürdeki kistler küre şeklinde, 7-15 mikrom çapında ve düzgün, tek katmanlı bir duvara sahiptir. Kistler tek bir çekirdeğe sahiptir.
Naegleria kuşları trofozoitler.
Trofozoitlerin iki formu vardır. Naegleria kuşları: ameboid ve ameboflagellat, ikincisi insanlarda nadiren bulunur (BOS içinde). Ameboid trofozoitler 10-35 mikrom ölçülerindedir, ancak yuvarlandıklarında genellikle çapları 10° ve mikromdur. Kültürde, trofozoitler 40 mikronun üzerinde büyüyebilir. Sitoplazma granülerdir ve birçok vakuol içerir. Tek çekirdek büyüktür ve büyük, yoğun bir karyozoma sahiptir ve çevresel kromatin içermez.
Sappinya spp. kistler ve trofozoitler.
Sappinya insan örneklerinden nadiren izole edilen serbest yaşayan bir amip cinsidir. Cins dünya çapında bulunur ve memeliler ve sürüngenler de dahil olmak üzere birçok hayvanın dışkısında izole edilmiştir. Kistler ve trofozoitlerin her ikisi de iki çekirdeğe sahiptir.
Serbest yaşayan amip enfeksiyonları için dolaylı immünofloresan (IIF) testi.
Serbest yaşayan amibik enfeksiyonlarda brüt patoloji görüntüleri.
Laboratuvar Tanısı
Acanthamoeba spp.: Acanthamoeba enfeksiyon, biyopsi örneklerinin (beyin dokusu, deri, kornea) lekeli yaymalarının veya kornea kazımalarının mikroskobik incelemesinde trofozoitlerin ve kistlerin saptanmasıyla teşhis edilebilir. Laktofenol mavisi, akridin turuncusu, gümüş ve kalkoflor beyazı boyalar, histolojik kesitlerde ve çevresel numunelerde (yani peletlenmiş kontakt lens kutusu içeriği) akantamoebiasis tanısında kullanılmıştır. Granülomatöz amip ensefalit vakalarında, BOS'ta trofozoitler ve kistler nadiren bulunur. Acanthamoeba Page’rsquos salin içeren besleyici olmayan agar üzerinde laboratuvardaki klinik ve çevresel örneklerden kültürlenebilir ve Escherichia koli kaplama.
Nedensel organizmanın eş odaklı mikroskopisi veya kültivasyonu ve doğrudan immünofloresan antikor ile tanımlanması da faydalı olabilir. Çok ciddi vakalarda olduğu gibi çok sayıda kist ve/veya trofozoit olduğunda, kornea kazımalarında veya kontamine yüzeylerde (yani kontakt lens vakalarında) doğrudan mikroskopi yoluyla tanı mümkün olabilir. Yukarıda listelenen klinik örneklerde serbest yaşayan amip enfeksiyonlarının saptanması ve tanımlanması için artan sayıda PCR tabanlı teknik (geleneksel ve gerçek zamanlı PCR) tanımlanmıştır. Bu tür teknikler, seçilmiş referans tanı laboratuvarlarında mevcut olabilir.
Balamuthia mandrillaris enfeksiyon genellikle ölümden sonra teşhis edilir. PCR ile moleküler saptama dışında ve son zamanlarda metagenomik derin dizileme, B. mandrillaris doku örneklerinin immünofloresan veya immünoperoksidaz boyamasıyla en güvenilir şekilde saptanır.
İçin Naegleria kuşları enfeksiyonlarda tanı, beyin omurilik sıvısının (BOS) mikroskobik incelemesi ile konulabilir. Islak bir montaj üzerinde hareketli trofozoitleri tespit etmek mümkün olabilir ve Giemsa lekeli bir yayma tipik morfolojiye sahip trofozoitleri gösterecektir. Kanıtları saptamak için PCR kullanılabilir N. fowleri BOS ve beyin dokusunda. İnce bir çim ile kaplanmış besleyici olmayan agar plakalarında amebik kültür Escherichia koli mikroskobik yöntemlerle tespit olasılığını artırır. (Tanı hakkında daha fazla bilgi N. fowleri enfeksiyonlar).
Gerçek Zamanlı PCR
CDC'de gerçek zamanlı bir PCR geliştirilmiştir. Acanthamoeba türler, Naegleria kuşları, ve Balamuthia mandrillaris klinik örneklerde. * Bu tahlil, 18S küçük alt birim ribozomal RNA gen dizilerini hedefler ve bu üç parazitin aynı anda tanımlanması ve farklılaşması için farklı primerler ve TaqMan probları kullanır.
* Qvarnstrom Y, Visvesvara GS, Sriram R, da Silva AJ. Eşzamanlı tespiti için multipleks gerçek zamanlı PCR testi Acanthamoeba türler, Balamuthia mandrillaris, ve Naegleria kuşları. J Clin Microbiol 200644(10):3589-3595.
Laboratuvar Güvenliği
Serbest yaşayan amipler, özellikle kültürde çok sayıda bulunduğunda, laboratuvar personeli için potansiyel bir güvenlik riski oluşturabilir. Kişisel koruyucu ekipman (laboratuvar önlüğü ve göz korumalı eldivenler) her zaman giyilmeli ve diğer uygun BSL-2 önlemleri alınmalıdır. Açıkta kalan cilt bölgelerinde immünosupresif hastalıkları veya açık yaraları olan kişiler, serbest yaşayan amip kültürleriyle çalışırken daha fazla enfeksiyon riski altında olabilir.
Önerilen Okuma
Naegleria fowleri: Siddiqui, R., Ali, I.K.M., Cope, J.R. ve Khan, N.A., 2016. Biology and pathogenesis of Naegleria kuşları. Açta Tropika, 164, s.375-394.
hakkında daha fazla bilgi ve SSS Naegleria kuşları
Acanthamoeba spp.: Lorenzo-Morales, J., Khan, N.A. ve Walochnik, J., 2015. Bir güncelleme Acanthamoeba keratit: tanı, patogenez ve tedavi. Parazit, 22.
hakkında daha fazla bilgi ve SSS Acanthamoeba spp.
Balamuthia mandrillaris: Lorenzo-Morales, J., Cabello-Vílchez, A.M., Martín-Navarro, C.M., Martínez-Carretero, E., Piñero, J.E. ve Valladares, B., 2013. Balamuthia mandrillaris dünya çapında bir halk sağlığı sorunu? Parazitolojide Eğilimler, 29(10), s.483-488.
hakkında daha fazla bilgi ve SSS Balamuthia mandrillaris
Sappinya tür.: Walochnik, J., Wylezich, C. ve Michel, R., 2010. The cins Sappinya: Tarih, soyoluş ve tıbbi uygunluk. Deneysel Parazitoloji, 126(1), s.4-13.
Reddit mikrobiyologları, eğer amip Naegleria Fowleri göllerde, toprakta, suda bu kadar yaygınsa ve insanlar onunla yakın temas halindeyse, bu amipin bulaşması neden bu kadar zor?
Suyu burnunuza sokmanız gerektiğini biliyorum, ancak her yıl göllerden (amiplerin büyüdüğü) suları burnuna getiren binlerce insan olduğunu varsayıyorum. Bununla ilgili birçok makale okudum, ancak neden bu kadar nadir olduğu konusunda net bir açıklama yok. Çok su olması şart mı? Sadece bir serpinti mi? Amiple birlikte buhar soluyamıyor musunuz?
Düzenleme: Cevaplar için teşekkürler! Ortalıkta pek çok sansasyonel makale var ve çok az bilimsel bilgi var. Çok nadir görülen bir şeyi biraz daha iyi anlamak için konu hakkında küçük bir tartışma yapmak istedim. Ayrıca ne zaman su, nehir, göl vb. birikintileri görse bu konuda endişelenen bir arkadaşım var ve onu sakinleştirmek için sağlam argümanlar sunmak istiyorum.
Oportünisttir (kendi başına mutlu yaşar, bize ihtiyacı yoktur) ve bulaşması gerçekten çok zordur. Amip, beyne ulaşmak için koku alma (koku) sinirleri yoluyla kemikli bir plakadan geçmek zorundadır.
En yüksek riskli faaliyetler, suyun zorla burna sıkıldığı durumlardır; klasik, bir gölde su kayağı yaparken düşen bir kişidir, ancak son zamanlarda netti kapları gibi cihazların steril olmayan suyla kullanılmasıyla ilgili vakalar olmuştur.
İlginç, suyun burnundan nasıl yukarı itilmesi gerektiğini okudum. Kemikli plaka bunun nedeni olabilir mi? Olduğu gibi, suyun o plakaya zarar vermesi için solunması mı gerekiyor? Yoksa amip onu yiyebilir mi?
Selam. Bu bok benim işim ama unutmayın ki herhangi bir resmi sıfatla konuşmuyorum. İlk önce son sorunuzla başlamak istiyorum: teorik olarak, evet sadece bir tutam sizi yakalayabilir. Murin modelleri, yalnızca tek bir amipin bulaşıcı bir yükünü kanıtlamıştır. Kistlerin havada olduğu bulundu, ancak Naegleria'nın insan dokusunda ekskt yaptığı bilinmiyor (sanırım, beni bağışlayın, Endnote'um evde yok), bu nedenle buhar muhtemelen çok büyük bir şey değil. Ayrıca, enfeksiyona neden olmak için bir tür ozmotik şokun gerekli olduğunu tahmin ediyorum çünkü bu onların alevlenmesine neden oluyor. Kamçılı form yemek yemez, ancak bu küçük canavarların burun boşluğunda, yemek yemeye başlamaları gerektiği kadar yukarı çıkmaları gerekir. Trofozoitler oldukça iyi hareket eder, ancak kamçılı formlar onu mahveder. Ayrıca, diğer yanıtlarda belirtildiği gibi, ilk etapta aktif olarak çoğalmak için bile oldukça ılık suya ihtiyaçları vardır ve kistler gerçek amiplerden çok daha fazla kurumaya maruz kalırlar.
Yaz Aylarını Ararken, Neye Sahip Olduğumuzun Önemini Hatırlamayı Unutmayın.
Cesur sayesinde özgürlerin yurdu.
"Amerikan bayrağı rüzgar onu hareket ettirdiği için uçmaz. Onu korurken ölen her askerin son nefesinden uçar."
Amerika'da bu günümüzde, ülkemizi korumak ve hizmet etmek için silahlı kuvvetlerde aktif olarak listelenen 1,4 milyondan fazla cesur erkek ve kadın var.
Şu anda ABD ordusundan 2,4 milyon emekli maaşı artışı var.
Yaklaşık olarak, savaşlarda savaşan 3.4 milyondan fazla asker öldü.
Her yıl, herkes, plajların aşırı kalabalıklaştığı, insanların eğlenceli, güneşli bir barbekü için mangal yaktığı, yaz başlamadan önce bir "oyun öncesi" olarak sadece yaz etkinliklerinde bir artış olan Memorial Day Weekend'i dört gözle bekliyor.
Birçok Amerikalı, Anma Günü'nü kutlama ayrıcalığına neden sahip olduğumuzun gerçek tanımını unuttu.
Basit bir ifadeyle, Anma Günü, bugün yapmakta özgür olduğumuz her şeyi koruyarak ve hizmet ederek ölen düşmüşleri duraklatmak, hatırlamak, yansıtmak ve onurlandırmak için bir gündür.
Çoğunluğun geri adım atacağı bir zamanda ileri adım attığınız için teşekkür ederiz.
Benimkini korumak için ailelerinizle birlikte kaçırdığınız zamanlar için teşekkür ederim.
Kendi güvenliğiniz için inancınıza ve başkalarının dualarına güvenmeniz gerektiğini bilerek, kendinizi dahil ettiğiniz için teşekkür ederiz.
Bu kadar özverili olduğun ve onları hiç tanımasan bile başkalarını korumak için hayatını tehlikeye attığın için teşekkür ederim.
Zorlandığınız ve bizi temsil etmek için gönüllü olduğunuz için teşekkür ederiz.
Özveriniz ve titizliğiniz için teşekkür ederiz.
Sen olmasaydın, şimdi bize verilen özgürlüğe sahip olamazdık.
Dilerim o katlanmış bayrağı asla eline almazsın. Bayrak, Amerika Birleşik Devletleri'nin orijinal on üç kolonisini temsil etmek için katlanır. Her kat kendi anlamını taşır. Açıklamaya göre, bazı kıvrımlar özgürlüğü, yaşamı veya Silahlı Kuvvetlerde hizmet edenlerin annelerine, babalarına ve çocuklarına haraç ödemeyi sembolize ediyor.
Yaşadığınız sürece, annesini, kocasını, kızını, oğlunu, babasını, karısını veya bir arkadaşını yeni kaybetmiş biri olarak o bayrağın eline geçen aileler için sürekli dua edin. Her insan birileri için bir anlam ifade eder.
Amerikalıların çoğu hiç savaşta savaşmadı. Botlarını asla bağlayıp savaşa girmediler. Etraflarında silah sesleri patladığından, ertesi güne kadar hayatta kalma konusunda endişelenmeleri gerekmiyordu. Çoğu Amerikalı bu deneyimin nasıl olduğunu bilmiyor.
Ancak bazı Amerikalılar her gün ülkemiz için savaştıkları gibi yapıyorlar. Bu Amerikalılara teşekkür etmeli ve hatırlamalıyız çünkü geri kalanımız evimizde ve savaş bölgesinden uzakta güvende kalırken onlar ülkemiz için savaşıyorlar.
Birileri sizin için savaştığı için burada olduğunuzu asla hafife almayın ve size bu hakkı verdikleri için ölen insanları asla unutmayın.
Bu nedenle, bu hafta sonunu dışarıda kutlarken, bugün bizimle olmayanlara bir içki için ve her yıl Anma Günü'nü neden kutladığımızın gerçek tanımını unutmayın.
"…Ve eğer kelimeler bu adamlara borçlu olduğumuz borcu ödeyemiyorsa, elbette eylemlerimizle onlara olan inancımızı ve onları savaşa ve nihai fedakarlığa götüren vizyona bağlı kalmaya çalışmalıyız."
Amip proteini
amip proteini büyük hücreli mikroskobik bir organizmadır. Canlı organizmaları satan çoğu bilim tedarik şirketinde bulunur ve genellikle okullar tarafından kullanılır. Doğada, göletler gibi tatlı su kütlelerinde yaşar. Daha küçük tek hücreli yaratıklar, algler ve rotiferlerle beslenir. Rotiferler çok hücreli canlılardır ancak birçok tek hücreli olandan daha küçüktürler. Havuz suyunda başka amipler de var ama Amip protein boyutu nedeniyle öğrencilerin gözlemlemesi için iyi bir tanesidir. Aşağıdaki videoda gösterilmiştir.
Besleme
Bir amip, avını yakalamaya çalışırken amaçlı olarak yalancı ayaklıları genişletiyor gibi görünür, ancak aslında avın varlığı tarafından yaratılan belirli uyaranlara yanıt verir. Araştırmacılar, kimyasal gradyanlar, sıcaklık gradyanları ve elektrik alanları dahil olmak üzere çeşitli uyaranlara bağlı olarak yalancı ayakların üretildiğini keşfettiler.
Amip, yalancı ayaklarını avının etrafına ve üzerine uzatarak onu bir damla suya hapseder. Amipin hücre zarı sonunda avı her taraftan sarar ve amip gövdesine dahil olan bir besin kofulu oluşturur. Bu beslenme yöntemine fagositoz denir. Av tuzağa düştüğünde, sindirim enzimleri besin kofuluna girer. Bunlar avı öldürür ve sindirir
İnsanlar bazen amip gibi yavaş hareket eden bir canlının yukarıdaki videoda gösterilenler gibi hızlı yüzen canlıları yakalayabilmesine şaşırırlar. Amipin hız eksikliği aslında bir avantajdır çünkü avı etrafının sarıldığını algılamayabilir.
Üreme
amip proteini bir tür aseksüel üreme olan ikili fisyon adı verilen bir süreçle çoğalır. Önce hücrenin çekirdeği iki çekirdeğe bölünür ve daha sonra hücre iki hücreye bölünür. Bir çekirdek, kısa sürede ana hücrenin boyutuna dönüşecek şekilde genişleyen "kız" hücrelerin her birine girer.
Aşağıdaki bilgiler genel ilgi için verilmiştir. Açıklanamayan, ciddi veya tekrarlayan hastalık semptomları olan herkes, teşhis ve tedavi için doktora gitmelidir. Doktor, insanların hastalıkla ilgili sorularını yanıtlayabilecektir.
Naegleria fowleri'nin neden olduğu enfeksiyon genellikle bakteriyel veya viral menenjit ile karıştırılır. Spesifik olmayan erken semptomları nedeniyle durumu teşhis etmek zordur. Durumu teşhis etmek için doktor aşağıdaki testleri kullanır:
- Doğrudan görselleştirme: Yöntemde hastanın vücudundan BOS (beyin omurilik sıvısı) alınır ve amipin tespiti için mikroskop altında incelenir.
- Antijen algılama: Bu, dokulardaki antijenlerin varlığını tespit etmek için antikorların kullanıldığı hızlı bir süreçtir [9].
- Polimeraz zincir reaksiyonu testi: Amipin DNA'sını amplifiye etmek ve onları kolayca tanımlamak için spesifik bir moleküler aracın kullanıldığı bir test [10].
Diğer testler arasında beyindeki şişliği tespit etmek için BT taraması ve MRI bulunur.
Naegleria Amip
Havasu Gölü'nde geleceğin yüzücülerini nasıl güvende tutabiliriz?
Son haberlerde, sıcak su göllerinde yaygın olarak bulunan serbest yaşayan bir amip olan Naegleria fowleri'nin ölümcül bir enfeksiyonundan muzdarip olan Havasu Gölü'ndeki genç bir gencin trajik hikayesi yer alıyor.
Havasu Gölü'nde yüzmenin tehlikeli olup olmadığını soran ve yeni bir tatlı su gölü bulmaları gerekip gerekmediğini soran birkaç telefon ve e-posta aldık. Cevabımız, Naegleria fowleri'nden tamamen kaçınmak istiyorsanız, TÜM ılık su göllerinden, kaplıcalardan, göletlerden, nehirlerden ve birkaç yüzme havuzundan kaçının.
Tabii ki, bu biraz sert ve uzmanlardan gelen bilgilere göre gereksiz. Evet, Havasu Gölü ve diğer sıcak su kütlelerinde güvenle yüzebilirsiniz, ancak bilmeniz gereken bazı şeyler var.
Birincisi, Naegleria fowleri Amerika Birleşik Devletleri'ndeki tatlı su göllerinin çoğunluğu da dahil olmak üzere dünya çapında bulunmasına rağmen, enfeksiyon vakaları son derece nadirdir. Bir kaynağa göre, 1995 ile 2004 yılları arasında Amerika Birleşik Devletleri'nde sadece 23 vaka belgelenmiştir.
Naegleria Amip, Belirli Bir Yerel Alanla Sınırlı Değildir
Bu amip genellikle ılık, sığ ve durgun suda bulunur. Sıcak ne kadar sıcak? 80 derece ve üzeri, okuduğum makalelerde bildirilen sıcaklık.
Ancak sadece ılık suda yüzmek sorun yaratmak için yeterli değildir. Amipin vücuda burundan girmesi gerekir ve literatüre göre dalış gibi şiddetli bir su akıntısı yoluyla buruna girmesi gerekir.
Gerçek şu ki, nerede olursanız olun, su çok sıcaksa, hareket etmiyorsa ve sığsa, bazı hoş olmayan şeyler büyüyor olacak. Basit biyoloji.
Kafamı suya sokmaktan hoşlanmam, ancak çocuklar şiddetli bir şekilde kesmek istediklerinde ısrar ederse, daha soğuk sular bulurum (bu, Havasu'da daha sıcak aylarda, sadece yer değiştirerek bile mümkündür) veya burun klipsi takıyorlar.
Ancak su altına girmek enfeksiyon kapmak için yeterli değil. Normalde, amipin ya suya daldırılarak ya da başka bir yolla burnun içine zorla sokulması gerekir.
Beklenmedik bir silme işlemi yaparsanız su kayağı yapmaya ne dersiniz? Normalde amipin tipik olarak bulunmadığı daha serin ve daha derin sularda kayak yaparız.
Eğitim Yoluyla Kendinizi Koruyun
Bottom line, I believe it is important to understand possible dangers, learn about the threat, and then take steps in prevention.
I know the father of the young teen who died stated he would never let his children swim in Lake Havasu again. I understand his feelings. If my child drowned in a particular swimming pool or body of water, I would never want to see that body of water ever again.
This particular threat, although extremely rare, is not unique to Lake Havasu. If our goal is to protect our families, we need to take certain precautions when visiting any fresh water lake or other bodies of water. In Havasu the weather is already cooling, which means our water temperatures are also dropping. But next summer, when those water temperatures get above 80 degrees, we should be wearing a nose clip if we want to swim with our heads under water or do any major cannon ball jumping.
What do experts have to say on this issue? According to a recent quote by Dr. Rebecca Suneshine, deputy state epidemiologist of the Arizona Department of Health, “I would swim in Lake Havasu…and I would let my children swim there.” She went on to say the infection was incredibly rare.
Bobbi Holmes, October 5, 2007
Bunu Paylaş:
5 comments on &ldquo Life threatening dangers of swimming during times of excessive heat: Naegleria fowleri amoeba &rdquo
Selam.
I’ve read several articles and done sum research on lake Havasu..
Summer time the heat in the LHC lake area is very hot..
So definitely a danger in that respect..
But at all times of the year you have algee..
Which comes up off the bottom of the lake in the shallows..
I’ve been coming hear for a number of years now..
Winter and summer..
I’ve experienced an ear infection the last couple of years.
I was to believe it was from camping in the desert.
Due to the wind that blows..kicking up dust and sand etc etc..
But apon further research..
I’m beginning to believe it’s caused due to me swimming almost daily in LHC..
One of the main reasons I come here..
Research for your self.
Things like.
Where does LHC get there drinking water.?
Where does the sewage go..
What can breed in the water and be there year round.
Is there a situation caused due to boats / and other water craft used in this lake.
Remember.. this a lake.
The water isn’t draining at a constant flow like a river..
I have noticed there’s a big sign at Waters edge that lights up and flashes.
That warns people not to go in the lake due to excess amounts of contamination..
Mostly due to water craft..I thinx.
Just FYI..
To each his own..
Thanx you very much.
I hope this helps in sum small way.
Our family first moved to Lake Havasu over fifty years ago. Growing up, I spent most of my days on the lake. In fact, when I was in high school, I drove a boat to school each day—by myself.
Lake Havasu is a water reservoir, providing drinking water for Southern California. It’s actually a very clean lake. While there might be some areas—like perhaps in the Channel where you get a high concentration of boats and people in a smaller area that might cause some issues—overall I believe it is a clean lake.
As for the deadly Naegleria fowleri amoeba, that can happen ANYWHERE when two conditions are present:
1. Excessive heat
2. Stagnant water
It’s certainly not an issue unique to Havasu, nor is it not something that should keep swimmers out of the lake. People just need to be smart about it.
When water temperature in any body of water exceeds 80 degrees, avoid certain activities in the back coves, where there is still or stagnate water. Those would include letting your kids do cannon balls, diving, or taking them skiing and tubing through those stagnate areas, for risk they be thrown off and into the water.
From what I have read, swimming alone in hot stagnate water is not the risk, it is having the water violently shoved up your ears.
Why would motor boats be allowed on any fresh water lake, esp. Drinking Water. Electric motors have been around for a long time.
Lake Havasu supplies water to several states. And there have always been motorboats allowed on it. Not uncommon. But the amoeba is an issue unrelated to boats. Heat and stagnate water. Actually, the motor boats stirring up the water might be a good thing.
Lake Havasu literally sits on a river the colorado river which opens their dams everyday which flows . It may be a called lake havasu but its not a lake in reality its the colorado river dammed up like the rest of it all the way to the Rockies.
Which of these diseases results in meningitis caused by an encapsulated yeast?
A. cryptococcosis
B. histoplasmosis
C. candidiasis
D. coccidiomycosis
What kind of stain is most commonly used to visualize the capsule of cryptococcus?
A. Gram stain
B. simple stain
C. negative stain
D. fluorescent stain
Which of the following is the causative agent of East African trypanosomiasis?
A. Trypanosoma cruzi
B. Trypanosoma vivax
C. Trypanosoma brucei rhodanese
D. Trypanosoma brucei gambiense
Which of the following is the causative agent of primary amoebic meningoencephalitis?
A. Naegleria fowleri
B. Entameba histolyticum
C. Amoeba proteus
D. Acanthamoeba polyphaga
What is the biological vector for African sleeping sickness?
A. mosquito
B. tsetse fly
C. deer tick
D. sand fly
How do humans usually contract neurocysticercosis?
A. the bite of an infected arthropod
B. exposure to contaminated cat feces
C. swimming in contaminated water
D. ingestion of undercooked pork
Which of these is the most important cause of adult onset epilepsy?
A. neurocysticercosis
B. neurotoxoplasmosis
C. primary amoebic meningoencephalitis
D. African trypanosomiasis
Malzemeler ve yöntemler
Etik beyanı
The use of leftover CSF for making spiked samples was approved by the Ethics Committee of the Faculty of Tropical Medicine, Mahidol University (MUTM 2006–063) and the Ethics Review Committee for Research in Human Subjects, Ministry of Public Health, Thailand (Ref. No. 33/2550). A written informed consent form regarding the use of leftover CSF specimens for future research purposes was obtained from the patients. The CSF was completely anonymous and was not linked with the patients’ identification.
Parasites and bacteria
Naegleria kuşları, Naegleria gruberi, Acanthamoeba spp., trophozoites, isolated from environmental samples from our previous study [17] and confirmed by morphology, culture, mouse pathogenicity and sequencing.
Giardia duodenalis—cysts, cultured and confirmed by PCR.
kriptosporidyum parvum—oocysts, cultured and confirmed by PCR.
Entamoeba histolytica—trophozoites, cultured and confirmed by PCR.
Entamoeba coli—cysts, detected by morphology.
Toksoplazma gondi—oocysts, kindly provided by Prof. Marie Laure Darde, University Hospital, Department of Parasitology, Biological Resource Centre for Toksoplazma, Limoges, France.
Neospora caninum—tachyzoites, cultured and confirmed by PCR.
blastosist—confirmed by sequencing.
enterositozoon bieneusi—confirmed by sequencing.
Escherichia koli—kindly provided by the Department of Microbiology and Immunology, Faculty of Tropical Medicine, Mahidol University.
Cryptococcus neoformans—kindly provided by Prof. Srisurang Tantimavanich, Department of Clinical Microbiology, Faculty of Medical Technology, Mahidol University.
Tüberküloz—strain H37Rv, kindly provided by the Central Chest Institute of Thailand.
LAMP primer design
A set of five primers for LAMP were designed according to the published sequence of n. fowleri virulence-related protein (GenBank accession no. M88397) [18] using PrimerExplorer ver. 4 (http://primerexplorer.jp/elamp4.0.0/index.html). A forward inner primer (FIP), a backward inner primer (BIP), two outer primers (F3 and B3) and a loop primer (LB) were used for the LAMP. The primers were aligned and checked for specificity using NCBI GenBank and comparative genome Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) analysis. The oligonucleotide primers were synthesized with High Affinity Purification by Bio Basic Inc. (Ontario, Canada). The sequences and lengths of the primers are shown in Table 1.
LAMP assay.
The LAMP conditions were optimized with different parameters, including the concentrations of outer primers (0.1 to 0.4 μM), inner primers (1.2 to 2.0 μM), loop primer (0.2 to 1.0 μM), MgSO4 (5 to 10 mM), dNTPmix (1 to 2 mM), hydroxy naphthol blue (HNB) (80–160 μM), betaine (0 to 1 M), enzyme (2 to 10 U), assay temperature (60, 62, or 64°C) and incubation time (60, 90, or 120 min). Nine parameters, not including incubation time, were optimized one at a time and each optimization experiment was repeated three times. A non-template control (sterile water) as negative control and a positive control (DNA extracted from 100 n. fowleri trophozoites) were included for each LAMP run. The results were considered positive when the LAMP product showed a significant difference between positive amplification, i.e., when color changes from violet to sky blue and negative amplification, which remains violet with the presence or absence of the ladder-like pattern bands after electrophoresis. On the basis of the above optimization steps, the final reaction mixture (25 μl) contained 0.2 M each of outer primer (F3, B3), 1.6 M each of inner primer (FIP, BIP), 0.8 M of loop primer (LB), 1X of supplied ThermoPol buffer, 8 mM MgSO4 (New England Biolabs, Ipswich, MA, USA), 1.4 mM dNTP mix (Thermo Scientific, Vilnius, Lithuania), 0.8 M betaine (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), 120 μM HNB (Sigma-Aldrich), 8 units of en iyi DNA polymerase (New England Biolabs) with 2 μl total DNA as a template. Amplification was conducted at 64°C for 60 min and terminated at 80°C for 5 min.
Specificity of the LAMP primers.
To investigate LAMP primer specificity, DNA templates isolated from organisms described earlier were subjected to LAMP. In addition, DNA extracted from CSF from non-PAM patients and healthy human blood were included in the test. The specificity test was repeated twice. Negative controls were included for all experiments.
Determinations of lower limit of detection by LAMP and PCR in spiked CSF and water samples with pure cultures
The lower limit of detection of the LAMP assay was determined using known amounts of n. fowleri in pure cultures. The trophozoites were counted under a microscope with a hemocytometer and further serial 10-fold dilutions were prepared in phosphate buffered saline (PBS), ranging from 10 4 –1 cells. n. fowleri in each dilution was added into each 250 ml of water collected from a pond which was previously tested to be free of n. fowleri by microscopy and PCR, and 200 μl of pooled leftover CSF from non-PAM patients. CSF was obtained from HIV patients with neurological abnormalities. The water samples with cells were then centrifuged at 2,500 rpm for 10 min at 20°C as described by Puzon et al. [19]. Supernatant was discarded and samples resuspended in 1 ml of PBS, transferred to a 1.5 ml tube and reconcentrated by centrifugation at 10,000 rpm for 10 min at 20°C. Supernatant was then removed by pipette, before samples were resuspended in 200 μl PBS. Genomic DNA was extracted using a QIAamp DNA minikit (Qiagen, Hilden, Germany). LAMP sensitivity was compared with the conventional nested PCR method for n. fowleri [9]. Spiking experiments with different concentrations were repeated three times. In addition, another set of spiked water and CSF samples were subjected to DNA extraction using the heating method to compare the sensitivity obtained with DNA extraction by a commercial kit, to shorten the total completion time and to simplify the LAMP assay for the feasible diagnosis of field samples. The last dilution with all three samples testing positive was considered as the detection limit.
DNA extraction and PCR assays
Genomic DNA was purified from the organisms listed above for specificity testing, the spiked dilutions for sensitivity test and the water samples for validating the LAMP, using a QIAamp DNA minikit (Qiagen, Germany) per manufacturer’s protocol and the DNA was eluted in 100 μl TE buffer. 2 μl of the DNA template was used in LAMP and PCR. The extracted DNA was stored at -80°C until use.
For DNA extraction by heating method, 200 μl of each spiked water dilution was heated directly at 95°C for 10 min without the centrifugation and resuspension steps. The samples were then centrifuged at 14,000 rpm for 10 min and 2 μl of the supernatant was used as the DNA template.
Classical nested PCRs from previously published primers targeting Mp2Cl5 sequence [9] were selected to compare and evaluate the sensitivity and efficiency of the LAMP. The forward primer, Mp2Cl5.for (5’-TCTAGAGATCCAACCAATGG-3’) and the reverse primer, Mp2Cl5.rev (5’-ATTCTATTCACTCCACAATCC-3’) were used in the first round of PCR amplification, which contained 1X tak buffer, 2.5 mM MgCl2, 0.6 μM each of primer, 0.2 mM each of dNTP (Thermo Scientific, Vilnius, Lithuania), 2.5 units of tak DNA polymerase (Thermo Scientific, Vilnius, Lithuania), and 2 μl of extracted DNA. Reactions were cycled 35 times with first denaturation at 95°C for 5 min, followed by denaturation at 95°C for 1 min, annealing at 65°C for 1 min and extension at 72°C for 2 min. NS Mp2Cl5.for-in (5’-GTACATTGTTTTTATTAATTTCC-3’) and Mp2Cl5.rev-in (5’-GTCTTTGTGAAAACATCACC-3’) primers which amplified 110-bp fragment products were used for the nested PCR. The mixtures for the second PCR were the same as in the first round, except that the concentration of each primer was 0.5 μM. Two microliters of the PCR product from the first-round PCR were used in the second PCR. The LAMP and PCR products (7.5 μl) were analyzed by 2% agarose gel electrophoresis, stained with ethidium bromide, and observed under UV transillumination.
Collection of environmental water samples for n. fowleri analiz
We conducted a survey for n. fowleri in Thailand to validate the applicability of the newly developed LAMP assay. Eighty water samples from different locations were collected from stagnant water around the houses and near the markets during the flooding crisis in Nakhon Pathom Province, Thailand, during November 2011. 30 water samples were collected from rivers, canals, rain (from a rainwater tank supplying a house), tap (from a public water distribution system), ground and underground water in Nan, Phayao, Kanchanaburi, Chantaburi, Trat, and Trang Provinces, Thailand, from January 2012 to December 2013 (S1 Fig). Samples were collected in sterile glass bottles and labeled with date, time, and place of collection. The water samples were processed in the manner described in US EPA Method 1623 with some modifications [20]. Briefly, 1,000 ml of water from each site were added to a sterile bottle and immediately sent to the laboratory. Each water sample was concentrated by multiple centrifugation steps (10 min at 3,500 rpm) and the pellet was resuspended in 1 ml of PBS, kept for DNA extraction using a QIAamp DNA minikit. Each sample was tested in triplicate by both LAMP and PCR assays.
All of the positive detection from environmental samples by LAMP were further tested for confirmation as n. fowleri by bidirectional sequencing of LAMP products [21]. To do this, 1 μl of LAMP product was used as template in a PCR reaction with primers that flank within the LAMP product of the n. fowleri virulence-related protein, F2 (5’- CAATGAAAGAAACTTTGCACCT-3’) and B2 (5’- TCCATCCATTTGGATCGG -3’) (0.3 μM each of primer), dNTPs (0.2 mM), tak buffer (1X), MgCl2 (1.5 mM) and tak DNA polymerase (1 unit) in final volume 25 μl. The reaction was run as follows: 2 minutes at 95°C, 35 cycles of 95°C 30 sec, 55°C for 30 sec, 72°C 30 sec, followed by 10 minutes extension at 72°C. The PCR product was run on an agarose gel, purified, and sequenced on an ABI3730xl DNA Analyzer (Applied Biosystems). The sequences were analyzed and identified using the MEGABLAST search program (http://www.ncbi.nlm.nih.gov) from the GenBank database.
Istatistiksel analiz
McNemar's test was used to test for differences between the LAMP and PCR detection rates. The test was 2-sided and exact probabilities were calculated. The agreement between LAMP and PCR was also calculated through the Kappa coefficient with 95% confidence level [22]. All analyses were conducted with SPSS for Windows 18.0 (SPSS Inc.).
The amoeba Naegleria fowleri, commonly found in warm swimming water, can cause a “brain-eating” disease that is almost always fatal. UCSD researchers have now identified a number of drugs able to inhibit its growth in the lab, including the breast cancer drug tamoxifen and antidepressant Prozac.
Prozac seems to have a lot of side uses and side effects discovered lately.
The title of the post is a copy and paste from the first two paragraphs of the linked academic press release here :
The amoeba Naegleria fowleri is commonly found in warm swimming pools, lakes and rivers. On rare occasions, the amoeba can infect a healthy person and cause severe primary amebic meningoencephalitis, a “brain-eating” disease that is almost always fatal. Other than trial-and-error with general antifungal medications, there are no treatments for the infection.
Researchers at Skaggs School of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences at University of California San Diego have now identified three new molecular drug targets in N. fowleri and a number of drugs that are able to inhibit the amoeba’s growth in a laboratory dish. Several of these drugs are already approved by the U.S. Food and Drug Administration for other uses, such as antifungal agents, the breast cancer drug tamoxifen and antidepressant Prozac.
Wenxu Zhou, Anjan Debnath, Gareth Jennings, Hye Jee Hahn, Boden H. Vanderloop, Minu Chaudhuri, W. David Nes, Larissa M. Podust.
Enzymatic chokepoints and synergistic drug targets in the sterol biosynthesis pathway of Naegleria fowleri.
PLOS Pathogens, 2018 14 (9): e1007245
Naegleria fowleri is a free-living amoeba that can also act as an opportunistic pathogen causing severe brain infection, primary amebic meningoencephalitis (PAM), in humans. The high mortality rate of PAM (exceeding 97%) is attributed to (i) delayed diagnosis, (ii) lack of safe and effective anti-N. fowleri drugs, and (iii) difficulty of delivering drugs to the brain. Our work addresses identification of new molecular targets that may link anti-Naegleria drug discovery to the existing pharmacopeia of brain-penetrant drugs. Using inhibitors with known mechanism of action as molecular probes, we mapped the sterol biosynthesis pathway of N. fowleri by GC-MS analysis of metabolites. Based on this analysis, we chemically validated two enzymes downstream to CYP51, sterol C24-methyltransferase (SMT, ERG6) and sterol Δ8−Δ7 -isomerase (ERG2), as potential therapeutic drug targets in N. fowleri. The sterol biosynthetic cascade in N. fowleri displayed a mixture of canonical features peculiar to different domains of life: lower eukaryotes, plants and vertebrates. In addition to the cycloartenol→ergosterol biosynthetic route, a route leading to de novo cholesterol biosynthesis emerged. Isotopic labeling of the de novo-synthesized sterols by feeding N. gruberi trophozoites on the U13C-glucose-containing growth medium identified an exogenous origin of cholesterol, while 7-dehydrocholesterol (7DHC) had enriched 13C-content, suggesting a dual origin of this metabolite both from de novo biosynthesis and metabolism of scavenged cholesterol. Sterol homeostasis in Naegleria may be orchestrated over the course of its life-cycle by a “switch” between ergosterol and cholesterol biosynthesis. By demonstrating the growth inhibition and synergistic effects of the sterol biosynthesis inhibitors, we validated new, potentially druggable, molecular targets in N. fowleri. The similarity of the Naegleria sterol Δ8−Δ7 -isomerase to the human non-opioid σ1 receptor, implicated in human CNS conditions such as addiction, amnesia, pain and depression, provides an incentive to assess structurally diverse small-molecule brain-penetrant drugs targeting the human receptor for anti-Naegleria activity.
Sterols are important constituents of cell membranes. In a unicellurar organism, such as the human pathogen N. fowleri, the cell membrane delineates the physical boundaries of the cell and mediates interactions of the organism with its environment. N. fowleri is a free-living amoeba that may infect the human brain causing a fulminant infection called primary amebic meningoencephalitis (PAM). PAM has resulted in death in >97% of reported cases. Understanding the molecular and cellular biology of N. fowleri will facilitate the rational development of new therapeutic interventions. Using inhibitors targeting different enzymatic steps in the sterol biosynthesis pathway, we mapped metabolic intermediates and delineated the biosynthetic routes contributing to N. fowleri sterol homeostasis. An array of sterol molecules suggests that two different sterol types, ergosterol-like and cholesterol-like sterols, co-exist and may be dynamically regulated in N. fowleri. Disruption of sterol biosynthesis by drug candidates was detrimental to N. fowleri. Drugs targeting three different enzymatic steps resulted in growth inhibition effect. This effect was amplified when drugs targeting different enzymes were combined. The observed synergistic effect of these drugs lowers the individual drug concentrations required for biological activity including delivering anti-PAM drugs across the blood-brain-barrier.