We are searching data for your request:
Upon completion, a link will appear to access the found materials.
10 yıla yakın bir süredir standart qiagen kitlerini ve DH5a e kullanarak mini hazırlık yapıyorum. koli. Tipik olarak bir seferde 24 miniprep yapıyorum ve ardından enzim sindirimi, PCR, dizileme, vb. ile iyi plazmitleri tanımlıyorum. Fark ettiğim bir şey, iyi plazmitlerin genellikle kötü plazmitlerden daha yüksek DNA konsantrasyonlarına sahip olduğuydu. Bunun sadece batıl inanç olduğunu düşündüm, ancak birkaç kısa süre önce yapılan mini hazırlık grubuna baktım ve istatistikler yaptım ve iyi plazmitlerin istatistiksel olarak önemli ölçüde daha yüksek miktarda DNA'ya sahip olduğunu buldum. Bu kalıbı her zaman görmüyorum, ancak bunu InFusion tabanlı klonlama ve geleneksel kısıtlama enzimi tabanlı klonlama kullanırken gördüm. Mini hazırlık verilerimin tümüne erişimim yok, bu yüzden istatistiksel anlamlılık için her şeyi kontrol edemiyorum.
Öyleyse, neden "iyi" plazmitler, "kötü" plazmitlerden daha iyi DNA verimine sahip olsun? Bu kalıbı başka kimse fark etti mi?
Bildiğim kadarıyla, plazmit, çalışan bir antibiyotik direnç geni taşıdığı ve bakteriler bunu verimli bir şekilde çoğaltabildiği sürece, plazmit iyi durumda olmalıdır. Kötü plazmitler, bakterilerin vektör omurgasını birbirine bağlamayı başardığı ancak iyi çoğalmayan bir dizi oluşturduğu durumlar olabilir mi? Kötü plazmitin daha sonra çoğalmaya başlamaması ve böylece bakteri üremesinin gecikmesi bir zamanlama sorunu olabilir mi? Bakteri peletlerini tartmadım, bu yüzden bakteri üremesi ve plazmit verimi hakkında bir şey söyleyemem.