Normal Florada Stafilokoklar – Laboratuvar Ödevleri –Tez danışmanlığı – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Elektrik Mühendisliği Ödev Yaptırma – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri
Normal Florada Stafilokoklar
Amaç
Burun ve el kültürlerinde stafilokokları izole etmek ve tanımlamak için
Malzemeler
Kanlı agar plakaları (BAP)
Mannitol tuzu agar plakaları (MSA)
Steril bezler
Hidrojen peroksit Tüplü plazma (0,5 ml alikotlar) içeren damlalıklı şişe
Staphylococcus aureus için lateks aglütinasyon kiti
Prosedürler
1. Ön burunlarınızdan birinin zarını steril bir pamuklu çubukla temizleyerek kendi burnunuzdan bir kültür alın.
2. Nazal swabı bir kanlı agar ve bir mannitol tuzlu agar plağının üst çeyreği boyunca inoküle edin. Geri kalanı boyunca galibiyet
kolonilerin izolasyonu için her plaka eküvyonu dezenfektanla atın.
3. Sol elinizin avucundan bir kültür alın. Bir kanlı agarı ve bir mannitol tuzu agar plakasını aşılayın ve kolonilerin izolasyonu için sürme yöntemi ile ekim yapın.
4. Aşılama özenizi sterilize edin ve steril salinle nemlendirin. Nemlendirilmiş halkayı tırnaklarınızdan birinin altından geçirin.
Mümkünse biraz atıkları toplayın. Bir kanlı agarı ve bir mannitol tuzu agar plağını aşılayın ve sürme yöntemi ile ekim yapın.
5. Tüm plakları 35 ° C’de 24 saat inkübe edin.
6. Plakları inceleyin ve hem kan hem de mannitol plakalarında farklı koloni tiplerinden Gram boyaları yapın. Her smear üzerine bir damla hidrojen peroksit damlatarak, bir slayta ve bir kapiler pipetle az miktarda koloni büyümesi sürerek hem kan hem de mannitol plakalarında farklı koloni türleri üzerinde bir katalaz testi gerçekleştirin. Kanlı agar besiyerini kazmamaya dikkat edin, aksi takdirde yanlış pozitif sonuç alınabilir. Kabarcık oluşumunu gözlemleyin. Varsa bir mannitol pozitif stafilokok kolonisinde koagülaz testi gerçekleştirin, özenizi bir MSA plakasından alıp doğrudan 0,5 ml plazma içinde emülsiyon haline getirin (Deney 20.1, 6c ve d adımlarında olduğu gibi devam edin). Gram boyası üzerindeki kümelerde gram pozitif kok gösteren herhangi bir beta-hemolitik kolonide hızlı bir lateks aglütinasyon testi gerçekleştirin.
7. Gözlemlerinizi aşağıdaki tabloya kaydedin.
Kalıcı flora
Kalıcı flora özellikleri
Normal flora bakterileri
Kalıcı flora nedir
Kalıcı flora örnekleri
Normal flora üyeleri nelerdir
Normal flora nedir
Normal flora bakterileri nerede bulunur
Sorular
1. Stafilokok ve streptokokların mikroskobik morfolojisini Gram boyama ile görüldüğü gibi ayırt edin.
2. Koagülaz nedir?
3. ProteinA nedir?
4. S.aureus’un özellikleri, epidermidis ve S. aprophyticus’tan ayırt edilir mi?
5.S.saprophyticus, S.epidermidis’ten nasıl ayırt ediliyor?
6. Hangi türden Saprophyticus büyük olasılıkla izole edilebilir mi?
7. Anozokomiyal enfeksiyon nedir? Kimler alır? Neden?
8. Hastane hastaları arasında stafilokok enfeksiyonları neden sıktır?
9. S. aureusin insan bulaşıcı hastalıklarında oynadığı konuyu tartışın.
Streptococci, Pneumococci ve Enterococci
Hava ve yiyeceğe (burun, boğaz, ağız) maruz kalan üst solunum yolunun mukoza zarları normalde çeşitli aerobik ve anaerobik bakteri türleri gösterir: gram-pozitif kok (Streptococcus, Staphylococcus ve Peptostreptococcus türleri); gram negatif koklar (Neisseria, Moraxella ve Veillonella türleri); gram pozitif basil (Corynebacterium, Propionibacterium ve Lactobacillus türleri); gram-negatif basiller (Haemophilus, Prevotella ve Bacteroides türleri); ve bazen mayalar yer alır.
Bu flora, üst solunum yolunun çeşitli bölgelerinde biraz değişiklik gösterir. Burun zarları, stafilokokların baskınlığını gösterir. Boğaz (faringeal membranlar) en zengin mikrobiyal tür çeşitliliğine sahiptir ve sinüs membranlarında çok az sayıda organizma vardır.
Solunum yolunun daha derin bölgeleri (trakea, bronşlar, alveoller) mikroorganizmalar tarafından kolaylıkla kolonize edilmez, çünkü üst zarların siliyer epitelleri ile mukoza salgıları onları yakalar ve yukarı ve dışarı doğru hareket ettirir.
Genellikle üst solunum yolunda bulunan normal flora, bu bölgelerde geçici mikroorganizmaların girişini ve aşırı büyümesini önler. Bu davetsiz misafirlerin bazıları patojenik olabilir ve solunum astar hücrelerini veya daha derin dokuları istila edebilir.
Kommenal organizmalar tarafından sürdürülen koşullar bozulursa (konağın bağışıklık durumundaki değişiklikler, kommensallerin duyarlı olduğu antimikrobiyal ajanların uygulanması veya çok sayıda virülan, geçici patojenlere olağandışı maruz kalma yoluyla), diğer mikroorganizmalar daha sonra membranları kolonize edebilir ve istila edebilir.
DENEY : Streptokokların İzolasyonu ve Tanımlanması
Streptococcus cinsi, karakteristik olarak zincirler halinde düzenlenmiş gram pozitif koklar içerir. İnsan derisinin ve mukoza zarlarının normal florasında, özellikle de üst solunum yollarının normal florasında bir dizi streptokok türü bulunur. Bazı türler, diğerlerinden daha yaygın olarak insan bulaşıcı hastalıklarıyla ilişkilidir.
Birçok streptokok, kanla zenginleştirilmiş besiyeri gereksinimi de dahil olmak üzere titiz büyüme gereksinimlerine sahiptir. Çoğu havada iyi büyür ancak aynı zamanda oksijen yokluğunda da büyür (yani fakültatif anaeroblardır), bazıları oksijen geriliminin azalmasını ve CO2’nin artmasını (mikroaerofilik) tercih eder ve bazıları yalnızca oksijen yokluğunda büyür (anaerobik). anaerobik streptokoklar artık Peptostreptococcus cinsine yerleştirilmiştir. Streptokokların çoğunun büyümesi için 35 ° C’lik bir inkübasyon sıcaklığı idealdir.
Bir dizi streptokok türü, kırmızı kan hücrelerini yok eden maddeler üretir; yani, kırmızı hücre duvarının parçalanmasına ve ardından hemoglobin salınmasına neden olurlar. Bu tür maddeler hemolizinler olarak adlandırılır. Streptokokkal hemolizinlerin (streptolizinler olarak da bilinir) aktivitesi, organizmalar bir kanlı agar plakasında büyürken kolayca gözlemlenebilir.
Farklı streptokoklar kanlı agardaki kırmızı kan hücreleri üzerinde farklı etkiler üretir. Eksik hemolize neden olanlara ve kolonilerin etrafındaki hücrelerin sadece kısmen tahrip olmasına neden olanlara alfa-hemolitik streptokoklar denir. Karakteristik olarak, bu tip hemoliz, hemolitik bölgede agarın belirgin bir yeşillenmesi olarak görülür ve bu nedenle bu streptokok grubu da viridans grubu olarak anılır (Latince yeşil kelimesinden).
Hemolizinleri kolonilerini çevreleyen agar bölgelerindeki kırmızı hücrelerin tamamen yok olmasına neden olan türlerin beta-hemolitik olduğu söylenir. Kanlı agar üzerinde büyürken, beta-hemolitik streptokoklar, kırmızı opak bir ortamda berrak bölgelerle çevrelenmiş küçük opak veya yarı saydam kolonilerdir.
Bu reaksiyona dahil olan iki streptokokkal hemolizinden biri oksijen tarafından inhibe edilir. Etkisi en iyi yüzey altı kolonileri çevresinde veya kültür plakaları anaerobik olarak inkübe edildiğinde görülür. Bazı stafilokok suşları, Escherichia coli ve diğer bakteriler de beta hemoliz gösterebilir.