Neuroscience
This content is Open Access.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Davranış ve Uyaran Yanıtları Sırasında Yetişkin Drosophila melanogaster'ı Tüm Beyin Görüntülemeye Hazırlama
Chapters
Summary
Automatic Translation
April 27th, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Davranış sırasında ve uyaranlara yanıt olarak yetişkin Drosophila'nın tüm beynini imgelemek için özel olarak uyarlanmış bir yöntem sunuyoruz. Baş, tüm beyne optik erişime izin vermek için konumlandırılırken, sinek bacaklarını ve antenleri, hortumun ucunu hareket ettirebilir ve gözler duyusal uyaranları alabilir.
Transcript
Protokolümüz, farklı beyin bölgelerindeki nöronların davranışı şekillendirmek için nasıl etkileşime girdiğini anlamak için önemli olan davranış sırasında tüm sinek beyninin görüntülenmesine izin verir. Yayınlanan diğer protokollerin aksine, bu özellikle sinek bir koku, tat veya görsel stimülasyon tarafından davranırken ve algılanırken tüm beyne erişmek için geliştirilmiştir. Kafa boşluğu oluşturmak için.
Tutucuyu 3D yazıcıyla yazdırdıktan sonra, yapışkan bant parçasını stereo mikroskop altında düz bir yüzeye dikdörtgen olarak yerleştirin. Ve yaklaşık beş milimetrelik bir parçayı bir santimetre kesin. Bandın uzun tarafının ortasında 400'e 400 mikrometrelik bir sonraki yuvayı kesmek için paralel olarak sabitlenmiş iki neşter kullanın ve bandı tutucunun altındaki deliğin düz tarafının üzerine yerleştirin.
Bandı deliğin etrafına yaklaşık 500 mikrometre itmek için tokmak kullanın. Ve bandın üstünü ve tutucuyu örtmek için siyah oje kullanın. Ojenin en az bir saat kurumasına izin verdikten sonra, kafa yuvasına yaklaşık bir mikroliter gres eklemek için yuvarlanmış bir doku kullanın.
Gövde yuvasını hazırlamak için, yaklaşık iki santimetrelik geniş bir bant parçasını iki parçaya bölün ve 1,5 milimetre genişliğinde dilimler kesin. Ardından 0,3 milimetre derinliğinde bir omuz ve vücut yuvasını kesin ve bandın tutucuya uyduğundan emin olun. Bir sineği tutucuya sabitlemek için, önce diseksiyon mikroskobun altına buzlu sığ bir kap yerleştirin ve tutucuyu buzun üzerine yerleştirilmiş bir laboratuvar dokusunun üzerine baş aşağı yerleştirin.
Bir ila dört günlük dişi meyve sineklerini aşağılıktan aspire edin ve sineği eritilmemiş buza üfleyin. Sinek hareket etmeyi bıraktığında, kanatların tabanındaki sineği kavramak için Dell forseps kullanın ve sineği yuvanın içindeki boyunla tutucuya kaydırın. Gözler yuvanın her iki tarafına eşit olarak konumlandırılmalıdır.
Gerekirse, tutkalın başın arkasına ulaşmasını önlemek için başın üstüne bir mikroliter gres ekleyin. Daha sonra sineğin hareket etmediğinden emin olmak için vücudu bir mendil ve biraz buzla örtün. Başı sabitlemek için, tamamen arka görünümden yaklaşık 20 derecelik bir açıyla yerleştirin.
Ve duyusal ilgi alanını kirletmekten kaçınırken başın etrafına UV tutkal uygulamak için yuvarlanmış bir doku kullanın. Tat deneyleri için, hortumları çıkarmak için forseps kullanın ve hareketi önlemek için hortum tabanına tutkal ekleyin. Tat deneyi planlanmazsa hortumun kafasına itin ve yapıştırın.
Yapıştırıcıyı UV ışığıyla beş saniye boyunca tedavi edin ve başı çevreleyen alanları dikkatlice temizlemek, bacaklara ve kapılar toprağına, duyusal alanlara yapışabilecek kalan sıvı tutkalları çıkarmak için yuvarlanmış bir doku kullanın. Daha sonra bacakları gerektiği gibi öne taşımak için ince bir bant şeridi veya bir doku kullanın. Gövdeyi konumlandırmak için buz kabını çıkarın ve tutucuyu döndürün.
Sinek etrafındaki suyu çıkarın ve sinek anesteziden iyileşmeden önce hızlı hareket ederek vücut yuvası bandını deliğin üzerine yerleştirin ve boynu abartmamaya dikkat ederek sineğin vücudunu hafifçe aşağı itin. Kalan büyük delikleri bantla kapatın ve tutkalın bu konuma yapışmasını önlemek için başın arkasına yaklaşık bir mikroliter gres ekleyin. Toraksın etrafına ve bant ve toraksın üzerine UV tutkal boyamak için yuvarlanmış bir doku kullanın ve tutkalı yaklaşık beş saniye boyunca UV ışığıyla iyileştirin.
Laboratuvar dokusu ile herhangi bir gresi ve kesilmemiş yapıştırıcıyı dikkatlice çıkarın ve başın üstüne yaklaşık bir mililitre salin ekleyin. Herhangi bir hava kabarcığı kenara itmek ve tuzlu su üzerine bir kapak kayması yerleştirerek ve ön tarafta tuzlu su olup olmadığını kontrol etmek için tutucuyu döndürerek sızıntıları kontrol etmek için forseps kullanın. Salin görülürse, salini çıkarın ve deliği daha fazla tutkal veya daha fazla gresle sabitlayın.
Başı kesmek için en yüksek büyütmeyi seçin ve boynun her iki tarafındaki merkezi koyu kütikül üçgeninin tabanında iki kesik yapmak için keskinleştirilmiş çok ince önlükler kullanın. Koyu üçgenin etrafını kesin ve manikranın bu kısmını çıkarın. Kas 16 ve yemek borusu bu delikten görülebilir ve ritmik olarak hareket etmelidir.
Yemek borusunu delmeden kas 16'yı kesmek için bu bölgenin üst kısmını dikkatlice sıkıştırmak için çok ince tokmakları kullanın. Ritmik hareket durursa kas 16 muhtemelen çıkarıldı. Kas, koyu üçgen bölgesinin medial kenarından başlayarak eksöke edildiğinde, kalan manikürü küçük parçalar halinde dikkatlice kesmek ve çıkarmak için bir makas çifti gibi önsezileri kullanın.
Daha sonra kavramak için tokmakları kullanın ve yavaşça ve istikrarlı bir şekilde bir seferde bir hava kesesini çekin. Bu videoda, bu iki meyve sineği beyninin tüm nöronlarında bir kalsiyum probu ifade edildi. Ve bir koku sunuldu.
Bu deneyde kalsiyum sensör ekspresyonu dopaminerjik ve serotonerjik nöronlarla sınırlandırıldı. Beyin üzerindeki güçlü senkron aktivite ile tüm beynin belirli bir davranış sırasında nasıl gözlemlenebileceğini gösteren sinek yürüme davranışı arasındaki sıkı korelasyona dikkat edin. Prensip bileşen analizi ve bağımsız bileşen analizi kullanılarak farklı renklerde vurgulanan farklı fonksiyonel bölgeler ayıklanabilir.
İşlevsel bölgelerin şekli ve lokalizasyonu, bölgelerin anatomik şablonlarla eşlenmesine izin verir. Beyin bölgelerini ve bazı durumlarda nöron tiplerini tanımlamak için. Uygun anatomik şablon floresan değerlerine hizalandıktan sonra nicel analiz için belirli anatomik beyin bölgelerinde ortalama yapılabilir.
Örneğin, bu analizde tüm bölgelerin yürüyüş sırasında tımar sırasından daha aktif olduğunu gözlemleyebiliriz. Sabırlı olun. Bu kalp diseksiyon tekniğini öğrenmek zordur.
Laboratuvarımda, insanların ustalaşmadan ve ilk yararlı önseçimlerini almadan önce ortalama üç ila dört aya ihtiyaçları var. Bu protokole uyarak floresan mikroskobu kullanarak büyük ölçekli beyin aktivitesini kaydedebiliriz. Işık alanı mikroskopisi gibi hızlı yöntemler özellikle belirtilmiştir.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact firstname.lastname@example.org.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact email@example.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact firstname.lastname@example.org.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@example.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.