İyon Çifti Kromatografisinin Modları – Biyokimya ve Moleküler Biyolojide Laboratuvar Teknikleri – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri
Bağlı sabit fazın karbon içeriği arttıkça, tutma genellikle artar. Bununla birlikte, zincir uzunluğunun ötesinde hiçbir iyileştirmenin meydana gelmediği bir sınır vardır; örneğin, kapasite faktöründe C, -C’ye kadar bir artış gözlenir ve bunun ötesinde hiçbir artış görülmez.
Bu, kritik zincir uzunluğu olarak adlandırılmıştır ve farklı çözünen maddelerle değiştiği bulunmuştur, bu da alkil zincirinin sadece bir kısmının ayırmada yer aldığını düşündürmektedir.
Karbon zinciri uzunluğunun seçicilik üzerindeki etkisi tartışmalı bir konu olmaya devam etmektedir ve bilimsel literatürde bir dizi çelişkili rapor bulunmaktadır. Bu nedenle, spesifik çözünen madde veya mobil faza bağlı olarak artan zincir uzunluğu ile seçicilikte bir artış veya azalma meydana geldiğinde örnekler alıntılanabilir.
Bununla birlikte, ters faz ayrımları için genel bir öneri, tutma daha büyük olduğundan ve seçicilik daha iyi olabileceğinden, bir Cı sabit faz kullanmaktır. Bir ayırma tanımlandıktan sonra, alkil bağlı zincirin uzunluğu, ayırma süresinde bir azalma sağlamak için azaltılabilir. Ancak, bu genellemenin istisnaları olduğu da kabul edilmelidir.
Yüksek Performanslı Ters Fazlı İyon Çifti Kromatografisi
Geleneksel ters faz kromatografisinin en ciddi sınırlaması, iyi pik simetrisini korurken yüksek polar veya iyonik bileşikleri kolon boşluk hacminden ayıramamasıdır. Son yıllara kadar, bu tip bileşikleri içeren ayırmalar için tercih edilen yöntem iyon değişim kromatografısıydı.
Belirli çözünen iyona zıt yüklü bir karşı iyonun eklenmesi ile iyon çifti oluşumu, belirli çözünen iyona bir şarj aracı sağlar ve bir yük nötralizasyonu sağlar ve organik kimyada birkaç on yıldır ekstraksiyon için kullanılmaktadır. Suda çözünür iyonik bileşikler sulu olmayan ortama aktarılır.
Bir kromatografik ayırmada iyon eşleştirmenin ilk uygulaması nispeten yeniydi ve yüklü organik moleküllerin ayrılması için teknikte kullanılan Horvath ve Lipsky’ye atfedildi.
İyon değiştirme kromatografisine popüler bir alternatif olarak iyon çifti kromatografisinin ortaya çıkışı, önceki tekniğin sağladığı çeşitli avantajlara atfedilebilir, bunlara aşağıdakiler dahildir:
(1) Ters fazlı iyon çifti kromatografisi, hem iyonik hem de iyonize olmayan eriyikleri ayırmak için kullanılabilir.
(2) Teknik, ayırmayı etkileyen benzer faktörlerle ters fazlı kromatografiye benzer; bu nedenle, ters faz tekniklerine alışkın olan kromatografi için ters fazlı iyon çifti kromatografisini kullanmak kolaydır.
(3) İyon çifti kromatografisinde kullanılan kolonlar yüksek kromatografik verime sahiptir.
(4) Gradyan elüsyonlarından sonra, orijinal koşulların yeniden kurulması, iyon-çiftli kromatografide iyon değişim kromatografisinde gerekli olabilen oldukça uzun sürelerle karşılaştırıldığında genellikle hızlıdır.
Jel Filtrasyon kromatografisi
Afinite kromatografisi
Sıvı Kromatografisi
Kolon kromatografisi
Adsorpsiyon kromatografisi
Gaz kromatografisi
Kromatografi Çeşitleri
Dağılma kromatografisi
İyon Çifti Kromatografisinin Modları
Şu anda, iyon çifti kromatografisi üç ana sınıfa ayrılabilir: Normal faz sıvı-sıvı iyon çifti (NPLLIP) kromatografisi, ters faz sıvı-sıvı iyon çifti (RPLLIP) kromatografisi ve ters fazlı iyon çifti (RPIP ) kromatografi. Bu kromatografik modların her biri, spesifik avantajları ve dezavantajları ile birlikte şimdi ele alınacaktır.
Normal Faz Sıvı-sıvı İyon Çifti Kromatografisi
Bu teknikte, sabit faz, karşı iyonu içerir ve katı destek (genellikle silika parçacıkları) üzerinde sulu bir kaplamada bulunur. Mobil faz, genellikle küçük miktarlarda ek bir organik modifiye edici içeren, karışmayan, polar olmayan bir organik çözücüdür.
Bu kromatografi modunun sağladığı iki önemli avantaj, mobil fazın değiştirilme kolaylığı ve güçlü bir flüoresan emisyonuna sahip olan spesifik karşı iyonların (pikrat ve naftalin-2-sülfonat gibi) eklenebilmesidir. UV’de yüksek sönme katsayısı; sonuçta ortaya çıkan iyon çiftlerinin oluşumu, başka türlü saptanamayan bazı çözünen maddelerin ölçülmesini de kolaylaştırır.
Bu iyon çifti kromatografisi biçiminin en büyük dezavantajı, kolonun hazırlanmasının kolayca gerçekleştirilememesi ve eşleştirilmiş iyonun durağan fazda tekrar tekrar yeniden üretilmesinin gerekmesidir. Teknik, ters fazlı iyon çifti kromatografisinin, karşı iyonun mobil faza eklenmesi rahatlığına sahip olması gibi basit bir nedenden dolayı yaygın olarak kullanılmamaktadır.
Ters Fazlı Sıvı-sıvı İyon Çifti Kromatografisi
Bu teknik 1970’lerin başında tanıtıldı ve sabit faz olarak kimyasal olarak bağlı bir hidrofobik silika partikül desteği etrafında organik bir kaplama ve karşı iyonu içeren sulu bir mobil faz da kullanır.
Kullanılan organik kaplama genellikle pentan-1-01’dir ve hidrofobik destek oktil veya oktadesil bağlı fazlı silika paketleridir. Bu modda, bir kromatografik ayırma, karşı iyon konsantrasyonunun ayarlanmasıyla veya sabit fazı içeren organik kaplamanın değiştirilmesiyle hem seçicilik hem de tutma süresi için de manipüle edilebilir.
Bu tekniğin normal faz tekniğine göre avantajları, kolonların nispeten kararlı olması ve kromatografik koşulların ayırmaları iyileştirmek için kolayca ayarlanabilmesidir. Dezavantajları, bazı hidrofobik çözünen iyonların sabit faza bölünme eğilimine sahip olmaları ve bu nedenle iyon çifti oluşumuna ek olarak destek üzerinde adsorpsiyon dahil olmak üzere karışık bir tutma mekanizmasına da neden olmasıdır.
Bu tekniğin bir başka dezavantajı, hidrofobik desteğin etrafındaki organik kaplamanın muhafaza edilmesinin gerekmesidir. Sıvı-sıvı kromatografik mod ile ilişkili sorunların üstesinden gelmenin açık çözümü, basit bir kimyasal olarak bağlı hidrofobik sabit faz kullanmaktır ve bu nedenle günümüzde çabaların çoğu ters fazlı iyon çifti kromatografisi üzerinde de yoğunlaşmıştır.
Ters Fazlı İyon Çifti (RPIP) Kromatografisi
RPIP kromatografisi, bir hidrokarbonlu sabit faz ve karşı iyonu da içeren sulu veya sulu-organik bir mobil faz kullanır. Sabit faz genellikle oktadesil bağlı fazdır ve mobil faz genellikle organik modifiye edici olarak metanol veya asetonitril içeren sulu bir tampondur.
Karşı iyonların seçimi, ayrılacak çözünen maddelere bağlıdır, ancak genel olarak asitlerin ayrılması için mobil faza hidrofobik bir organik baz eklenirken, bazların ayrılması için bir hidrofobik organik asit eklenir. Diğer bileşiklerin ayrılması benzer şekilde uygun bir karşı iyon ilave edilerek de elde edilir.
Adsorpsiyon kromatografisi Afinite kromatografisi Dağılma kromatografisi Gaz kromatografisi Jel Filtrasyon kromatografisi Kolon kromatografisi Kromatografi Çeşitleri Sıvı Kromatografisi