Jensen Ackles bir dönem modellik yaptı ve 1997 yılında Llyod V. Berkener High School'dan mezun olduktan sonra "Days of Our Lives" adlı dizide rol aldı. Bu diziden sonra Jensen, James Cameron'un Dark Angel adlı TV serisi için Vancouver'a gitti. 2003'te "Dawson's Creek" adlı dizide CJ rolünü oynadı. 2004'te Smallville adlı dizide oynamak için tekrar Vancouver'a geri döndü ve bu dizide Jason Teague adlı karakteri canlandırdı. 2005 yılında CW'nin yeni korku serisi "Supernatural"daki Dean Winchester karakteri ile ekranlara geri döndü.