Sitopatik Etkiler – Laboratuvar Tanı Bilimi – Laboratuvar Ödevleri – Lab Ödevleri – Kimya Mühendisliği – Kimya Ödev Yaptırma Ücretleri
Hücreler, steril koşullar altında kültür şişelerinde kültürlenir. Hazırlık genellikle dikey laminer akışlı dolaplarda yapılır, ancak bunsen brülörü ve uygun aseptik teknik ile açık bir tezgah üzerinde yapılabilir. Şişelere eklenen medyum izotonik ve uygun pH değerine sahip olmalıdır ve genellikle fizyolojik olarak dengelenmiş tuz solüsyonlarına dayanır.
Besiyerinin tam bileşimi hücre tipine göre değişebilir. Detaylı tarifler pratik rehber kitaplarda mevcuttur. Renk değişimiyle hücre metabolizmasının tanınmasını sağlamak için bir gösterge boyası eklemek yararlıdır (sağlıklı ve büyüyen hücreler bir asit ortamı üretir).
Büyüme için esansiyel amino asitler ve protein gereklidir ve bunlar genellikle fetal buzağılardan elde edilen serum formunda sağlanır.
Antibiyotikler, ana kaynakları su kaynaklı bakteriler, karbondioksit kaynağından maya ve kontamine reaktiflerden veya operatörden Mycoplasma türleri olan bakteriyel veya fungal kontaminasyona karşı ek bir önlem olarak büyüme ortamına sıklıkla eklenir. İkincisi, hücrelerin virüs büyümesini destekleme yeteneğini ciddi şekilde azaltacaktır.
Bir kez birleşme noktasına ulaşıldığında, hücreler, steril bir silikon kauçuk çubukla (‘kauçuk polis’ olarak bilinir) fiziksel araçlar kullanılarak veya daha genel olarak, hücrelerin plastiğe bağlanmasını bozan tripsin ve EDTA ile muamele edilerek sıyrılabilir. yüzey ve hücrelerin yuvarlanıp ayrılmasına neden olur.
Hücreler bu aşamada bir hemositometrede sayılabilir ve yeniden süspansiyon için uygun hacim (optimum tohumlama konsantrasyonunu vermek için) hesaplanabilir. Bununla birlikte, deneyimle, gerekli hacmin kaba bir tahmini yeterli olacaktır.
Hücreler daha fazla pasajlanmayacaksa, ör. inokülasyon için hazır tüplerde bulunanlar, daha sonra birleştiklerinde, büyüme ortamı bakım ortamı ile değiştirilir, fark, ikincisinde serum konsantrasyonunun önemli ölçüde azalmasıdır. Bakım ortamındaki hücre kültürü tüplerindeki uyumlu hücreler birkaç gün hayatta kalacaktır, ancak sonunda ortam değişikliklerine rağmen yavaş yavaş bozunacaklardır ve bu noktada atılmaları gerekir.
Virüs araştırmaları için çoğaltılan hücreler, ihtiyaç fazlası olduğunda sıvı nitrojende dondurulmuş tohum havuzları olarak korunabilir. Hücreler, buz kristali oluşumunun hücrelere zarar vermesini önleyen dimetil sülfoksit içeren ortamda süspansiyon haline getirilir. Yenilenen ihtiyaçla veya kullanımdaki hücrelerin bakteriyel kontaminasyonu durumunda, dondurulmuş hücreler hızla çözülebilir ve taze kültürler hazırlanabilir.
Virüs İzolasyonu İçin Klinik Örnekler
Virüs izolasyonu için hücre kültürüne inoküle edilebilecek klinik materyalin doğası üzerinde herhangi bir kısıtlama yoktur. Sıvı örnekleri (örn. Beyin omurilik sıvısı, CSF, tükürük, idrar, vezikül sıvısı, nazofaringeal aspirat, bronkoalveolar lavaj sıvısı, kan, ishalli dışkı) laboratuvara steril bir kapta gönderilebilir ve uygun hücre kültürü tüplerine tek başına veya sonra eklenebilir.
Kuru sürüntülerde virüsler hayatta kalamayacağından, sürüntüler (örneğin konjunktival, boğaz, ülser tabanı, servikal, rektal) viral taşıma ortamına (izotonik sıvı artı mikrobiyal aşırı büyümeyi engellemek için antibiyotikler) bölünmelidir.
Şişeyi, çubuktan ortama mümkün olduğunca fazla hücresel malzeme salmak için vorteksledikten sonra, taşıma ortamı hücre tabakalarına aşılanır. Doku biyopsileri de (örn. Beyin, bağırsak, akciğer) viral taşıma ortamına yerleştirilmelidir. Doku ince bir şekilde kıyılabilir ve hem hücresel hem de süpernatan malzeme kültüre aşılanabilir.
Sitopatik Ne Demek
Sitopatik etki Nedir
Viral replikasyon aşamaları
Virüslerin çoğalması
Virüsler enzim sentezler mi
Virüslerin üretilmesinde kullanılan ortamlar
Sitopatik etki nedir Tıp
Sitopatik etki virüsler
Virüs Büyümesinin Belirlenmesi
Bir klinik örnek hücre kültürü tüplerine inoküle edildikten sonra tüpler, materyalin elde edildiği yere en çok benzeyen koşullar altında inkübe edilir. Çoğu kültür 37 ° C’de tutulur, ancak bazı virüsler, en önemlisi üst solunum yolundakiler, biraz daha düşük bir sıcaklıkta daha iyi büyüyecektir, örn. 33 ° C’de ve% 5 karbondioksit varlığı.
Kültürler, hücre tabakasının havalandırılmasını iyileştiren veya sabit tutulabilen bir silindir tambur üzerinde yavaşça döndürülebilir. Mikrobiyolog için artık zorluk, belirli bir hücre kültürünün içinde virüsün çoğaldığı hücreler içerip içermediğini belirlemektir. Bu hedefe ulaşmak için bir dizi seçenek mevcuttur.
Sitopatik Etkiler
Virüsler hücreler içinde çoğaldığında, hücreler morfolojik değişikliklere uğrayabilir, ör. zar geçirgenliklerinin değişmesi nedeniyle şişme, hücre ölümüne bağlı büzülme, virüs tarafından kodlanan bir füzyon proteininin varlığına bağlı dev çok çekirdekli hücre oluşumudur.
Işık mikroskobu altında görülebilen hücresel morfolojideki bu değişiklikler, sitopatik etki (CPE) olarak adlandırılır ve bu değişiklikleri tetikleyen virüslerin sitopatojenik olduğu söylenir. Bu nedenle, bir hücre kültürü içinde bir virüsün varlığı, bir CPE’nin geliştirilmesi için bir ışık mikroskobunun düşük güçlü lensi altında kültürün düzenli olarak incelenmesi (örneğin her gün) ile belirlenebilir.
Bir CPE’nin tam görünümü, hangi virüsün sorumlu olduğuna ve hangi hücre tipinde meydana geldiğine göre değişkendir. Hücreler boyut olarak şişebilir, büzüşebilir veya sinsitiye (dev çok çekirdekli hücreler) dönüşebilir.
Etki, tüm hücre tabakası boyunca yaygın olabilir veya doğası gereği çok daha odaklanabilir. Münhasıran olmasa da ağırlıklı olarak ortasından ziyade çarşafın kenarında görülebilir. CPE’nin gelişme hızı 18 saatten 4 haftaya kadar değişebilir.
Eğitimli bir virolog, tüm bu faktörlerin yanı sıra belirli bir numuneyle ilgili klinik ayrıntıları hesaba katarak, yalnızca CPE’nin ışık mikroskobu gözlemi yoluyla kültürde hangi virüsün bulunduğunu kesin bir şekilde teşhis edebilecektir.
Bu nedenle, 24 saatlik kültürden sonra ortaya çıkan ve ardından tüm hücre yaprağını yok etmek için hızla yayılan balon hücrelerinden oluşan vezikül sürüntüsünden kaynaklanan bir CPE’nin herpes simpleks virüsünden kaynaklanma olasılığı yüksektir.
Bunun tersine, CPE’nin kültürde yalnızca 10 gün sonra, yaprağın merkezinde sadece iki veya üç şişmiş hücre odağında görünmesine neden olan ve önümüzdeki birkaç gün içinde yavaşça yayılan bir vezikül sürüntüsü muhtemelen suçiçeği kaynaklı olabilir. -zoster virüsü. Spesifik virüslere özgü CPE’lerin resimleri gösterilmektedir.
Virüslerin Geçişi
Bir hücre sayfası içindeki virüs replikasyonu, görünür CPE’nin tek nedeni değildir. Yaprağa aşılanan malzeme sitotoksik olabilir, özellikle dışkı örneklerinde sık görülen bir sorun veya alınan tüm önlemlere rağmen diğer mikroorganizmalarla kontaminasyon meydana gelebilir. Bir CPE’nin kökenine ilişkin herhangi bir şüphe varsa, toksik etkinin aksine bir virüsü ayırt etmenin basit bir yolu, varsayılan virüsü geçmeye çalışmaktır.
Sitopatik etki Nedir Sitopatik etki nedir Tıp Sitopatik etki virüsler Sitopatik Ne Demek Viral replikasyon aşamaları Virüsler enzim sentezler mi Virüslerin çoğalması Virüslerin üretilmesinde kullanılan ortamlar