DEKALSİFİKASYONU TEST ETMEK
Dekalsifikasyon testi X-ray ile yapılmaktadır. Ancak histoloji laboratuvarlarında olmadığından genellikle X-ray denemesi yapılamaz. Bunun yerine dekalsifiye edilmiş sıvı içinde kalsi¬yum tuzunu arama kimyasal testi yapılabilir. Negatif bir sonuç dekalsifikasyonun iyi gerçekleştiğini gösterir.
5 cc dekalsifikasyon sıvısına turnosol alkali oluncaya kadar damla damla güçlü amonyum eklenir. 0.5 cc doygun amonyum oksalat eklenir. Amonyum eklemesinden sonra eğer çözelti bulanırsa, bu kalsiyum varlığını gös¬terir ve çözelti test için uygun değildir. Spesimen taze, kalsiyumsuz sıvı içersine konur. Spesimenin konmasından sonra, hem amonyum hem de amonyum oksalat yeniden eklenir. Eğer 30 dakika sonra sıvı hala berraksa dekalsifikasyon başarılmış demektir. Kemik yüzeyinde kuvvetli asidik dekalsifikasyon sıvılarının gaz baloncukları oluşabilir. Eğer işlem sallanarak yapılırsa, genellikle balonlar hareket eder ve böylece dekal¬sifikasyon daha sağlıklı olur.
DEKALSİFİKASYON SONRASI İŞLEMLER
Frozen kesitler, kemik ve kemik tümörleri için kullanışlıdır, Dekalsifiye kompakt kemiğin küçük parçaları dondurma mikrotomunda kesilir ve herhangibir destek ortamına gerek yoktur. Ancak süngerimsi kemik trabeküllerinin ve kemik iliği hücrelerinin işlem sırasında kaybolmaması için gömülebilir. Frozen kesit yöntemi ile daha çabuk preperasyon yapılabilir.
Parafin bloklara gömme, sakıncalarına rağmen kemik patolojisinde rutin metoddur. Çift gömme, parafin ve selüloz nitrat kombinasyonu daha avantajlı bir gömme ortamıdır. Özellikle süngerimsi kemik gibi hem sert hem de yumuşak doku içeren yapılarda, plastik materyellerde bu çift materyele gömme gibi avantaj sağlarlar. Gömme ortamı seçildiğinde, dehidratasyondan sonra impregresyon iş-lemine geçilir. Gömme materyeli ile kemikler gömülür. Otomatik doku takip makinası ile 16-24 saatlik kısa işlem spongioz kemi¬ğin küçük parçaları ve kemik iliği için uygun değildir. Parafin impregrasyonu için vakum fırınının kullanılması önerilmektedir. Selüloz nitrat (celloidin veya LVN), kemikte 2 önemli amaç için kullanılan değerli bir gömme ortamıdır.
1-Vertebralar gibi değişik yo¬ğunluktaki geniş doku kitleleri ve femurun orta sütunu gibi dens, kortikal kemik preperasyonlarındaki kolaylığı,
2-Orta kulaktaki daha hassas kemiksi yapılarda oluşan büzülme, biçim bozulmalarını önemli ölçüde azaltır. Bu avantajlarına karşın sürecin yavaşlığı ve kesit kalınlığı¬nın 15-20 mikron olması dezavantajlarıdır.
Kemik preperatları çok keskin bıçaklı ağır mikrotomla kesilir. Ke¬sit kalınlığı 6-8 mikron olmalıdır. Alınan kesitlerin yapıştırıcılı bir lama alınması ve dikkatli olarak kurutulması gereklidir.
YÜZEY DEKALSİFİKASYONU: Bazen, sıklıkla da blokların trimlenmesi esnasında kesitler arasın¬da beklenmeyen kalsifikasyon alanlarına rastlanır. Bu alanlar bıçağa di¬rençlidir. Böyle alanlar bir bıçak ya da iğne yardımı ile kazınarak çı¬karılır ya da bloklar mikrotomdan alınarak ya % 10' luk distile su ile hazırlanmış formik asit veya % 5' lik nitrik asitte 1 saat ya da daha fazla bırakılır. Progressif bir dekalsifikasyon daha sonraki boyama ba¬samağını ya az etkileyerek ya da hiç etkilemeden oluşacaktır. Blok, suda biraz yıkandıktan sonra kurutulur ve mikrotoma yerleştirilir.