Merhaba ben Christian. Roche’ta biyokimya teknisyeni olarak çalışıyorum. Uzun zamandır immünoassay gelişiminde çalışıyorum.
Bugün, bir hücre içindeki belirli proteinleri görselleştirmemize izin veren bir teknik olan immün boyama için lamlar hazırlıyorum. Bunu yapmak için, sadece bir tip proteinle spesifik olarak reaksiyona giren bir antikor ekliyoruz ve bir mesaj taşıyan bir hedef güvercin gibi, bu antikor bir flüoresan işaretleyici taşıyor. Hücreleri yıkadıktan sonra, sadece söz konusu proteine sahip olanlar bir mikroskop altında floresan görünecektir. Bu şekilde, belirli bir proteinin hücrelerin ne kadar ifade edip etmediğini ve potansiyel ilaçların etki mekanizması ve güvenliği ile ilgili bilgi verdiğimizi görebiliriz. Dolabın üzerine yapıştırılmış grafiklerin bir örneğini görebilirsiniz!
Merhaba, benim adım Elodie. Farmakoloji yüksek lisansına sahibim ve bu alanda dört yıldır çalışıyorum.
Burada yaptığınız şey, benim örneğimdeki protein miktarına özel olarak tepki veren bir renklendirici ilavesiyle problarımın protein konsantrasyonunu ölçmek. Reaksiyon tamamlandıktan sonra, özel bir makine ile rengin yoğunluğunu ölçerek protein miktarını ölçebilirim. Bu, potansiyel bir ilacın güvenliğini değerlendirmek için gerçekleştirdiğimiz birçok testten biridir.
Merhaba. Ben Christine,.Roche'ta test geliştirmede uzun yıllara dayanan deneyime sahip bir biyoloji teknisyeniyim.
Bugün, bir mitotoksisite testinin bir parçası olarak bir seyreltme serisi oluşturuyorum. Bu, potansiyel bir ilaç adayının hücrelerin normal duplikasyon davranışını veya mitozunu etkileyip etkilemediğini görmemizi sağlayan önemli bir güvenlik testidir ve bu nedenle normal hücre replikasyonunun embriyonik gelişim gibi önemli olduğu süreçleri etkileyebilir. Seyreltme yoluyla, bileşiği, doz ve sonuç arasında bir ilişki olup olmadığını görmek için farklı konsantrasyonlarda test edebilir ve bir bileşiğin biyolojik etkisini tanımlayan tüm parametreleri ölçebiliriz.
Bu, sıvı işleme ve analiz hazırlama laboratuvarında göreceğiniz birçok santrifüjden biridir. Bu santrifüjler, numune plakalarını veya kaplarını çok hızlı döndürerek, DNA veya proteinler gibi küçük katı partikülleri, kabın dibine batırırken, sıvılar üstte kalır. Bu santrifüj 96 oyuklu plakaları döner; her plakadaki her delik ayrı bir örnek içerir.
Sıcaklığa duyarlı bileşikler olduğunda, numuneleri soğuk tutan bir kap içinde bulunan bu sıcaklık kontrollü mikrosantrifüjlere güveniyoruz. Çok hızlı süspansiyonlar içeren küçük kaplar döndürür, böylece katı parçacıklar dibe çöker.
Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR), genetik analiz için yeterli miktarda materyal oluşturarak tekrar tekrar örnek DNA'yı kopyalayarak ilaç keşiflerinde devrim yaratan bir prosedürdür. Bu bir termo-döngücü olarak bilinen bir PCR makinesidir. İşlem için gerekli olan PCR dizisi sırasında bir probun sıcaklığını artırabilir ve azaltabilir. Cihazda, DNA örneğini ve prosedür için gereken tüm enzimleri ve reaktifleri tutan delikli bir termal blok bulunur. Dizinin spesifik adımları sadece önceden belirlenmiş sıcaklıklarda meydana gelir ve makineler bu ısıtma ve soğutma adımlarını tekrar tekrar çevirir.
Bu küçük mikseri örnek tüpleri için kullanıyoruz. Siyah plaka üzerine bir tüp basılması, tüpün hızlı bir şekilde çalkalanmasına ve içeriğinin iyice karışmasına neden olur.
Çok hassas miktarlarda sıvıyı ölçmek ve dağıtmak için bunlar gibi çok çeşitli, birkaç mikrolitreyi bile ölçebilecek pipetler kullanıyoruz.
Laboratuvarımızda, tamponlar ve enzimatik reaktifler gibi oda sıcaklığının altında depolanması gereken reaktifler ve çözeltiler için çeşitli buzdolapları bulunmaktadır. Hayır burada öğle yemeğimizi saklamayız; bunun için harika bir kafeteryaya sahibiz.
Potansiyel ilaç adaylarının biyobelirteçler veya genler üzerindeki etkilerini ölçtüğümüzde, her adımda kullanılan madde ve reaktif miktarı üzerinde mutlak kontrole ihtiyacımız var. Bu elektronik pipetler, sıvıları aşırı hassasiyetle ölçmemize ve dağıtmamıza izin verir.
Hazırlık laboratuvarımızdaki pek çok cihaz gibi, bu karıştırıcı da işimizi hızlandırmaya yardımcı olmak için aynı anda birden çok örneği kabul eder. Homojen bir karışım oluşturmak için çalkalanırken sabit bir sıcaklıkta tutar.
Bu mikrosantrifüj sıvısını, DNA veya proteinler gibi sıvılarda asılı halde bulunan küçük katı parçacıkları ayırmak için kullanırız. Büyük laboratuvar santrifüjleri kadar hızlı dönmez, ancak birçok görev için kullanışlı ve yeterlidir.
Bu bizim PCR makinelerimizden sadece biridir. PCR makinelerimiz DNA örneğini birçok kez kopyalamamıza izin verir. Böylece genetik analiz için yeterli materyale sahip oluruz. Bu termo-döngücü, çoğaltma işlemi için gerekli olan önceden belirlenmiş bir diziye göre bir probun sıcaklığını düşürmektedir.
Çoğu tahlil, her biri farklı bir numune, aynı numuneden farklı bir konsantrasyon veya manipülasyon için farklı koşullara sahip 96 kuyucuktan yapılmış plakalarda gerçekleştirilir. 12 x 8 ızgarada düzenlenen kuyuları manuel olarak doldurmak için 12 kanallı pipetler kullanıyoruz. Ancak, bunun elle yapılması gerekmedikçe, normal olarak sıvıları 96 oyuklu plakalarımıza aktarmak için verimliliği ve güvenilirliği sağlayarak robotları kullanırız.
Bir süspansiyon santrifüjlerimizden biri ile ayrıldıktan sonra, “pelet” olarak da adlandırılan katı malzeme şişenin tabanına yapışır. Daha sonra, burada yükselen sıvıyı kolayca çıkarmak için gördüğünüz gibi küçük bir pompa kullanırız.
Her gün kurbağımızı öpüyoruz. Bir gün onun laboratuvar önlüklü bir prense ya da prensese dönüşmesini umuyoruz. O zaman işimize yardım edebilir!
Hücre kültürü örneklerinin bağışıklık lekelerini fotoğraflamak için bu floresan mikroskobu kullanıyoruz. Mikroskop, antikorlara veya diğer biyokimyasal reaktiflere bağlı olan florokromları harekete geçiren özel bir ışığa sahiptir. Daha sonra bu mitokondri, çekirdek veya lizozom gibi bu parlayan alt hücresel yapıların resimlerini yakalayıp etiketleyebiliriz.
Yandaki laboratuardaki bu yüksek içerikli görüntüleme (High-Content Imaging / HCI) cihazı, hücre kültürü görüntüleme ve analizimizi otomatik hale getiriyor ve mitokondriyal solunum veya hücre döngüleri gibi alt hücresel işlevler üzerinde birçok ilaca bağlı etkileri ölçmemize olanak sağlıyor.
Sağdaki renkli kareler, özel bir mikroskopla çekilen görüntülerin örnekleridir. Alt sıra, potansiyel hücreler üstte normal hücrelere eklendiğinde ne olduğunu göstermektedir. Bu örnekte vasküler sızıntıyı gösterilmiştir. Soldaki sarı diyagram, protein bazlı ilaçlar tarafından potansiyel olarak indüklenen bu istenmeyen yan etkinin basitleştirilmiş bir görselidir.
Bu slayt, potansiyel bir ilacın karmaşık organlardaki eylem ve güvenlik konularını daha iyi anlamak için oluşturduğumuz karmaşık 3D modellerin bir örneğini göstermektedir. Burada, bir insan karaciğeri taklit eden bir karaciğer in vitro (laboratuvar) modeline bakıyoruz ve bir bileşik in vivo (vücut içinde) olarak test edilmeden önce toksisite ve diğer önemli bilgileri ortaya çıkarabiliriz.