Ultrasonikasyon ile Hazırlanan Tampon Çözeltileri
Lizis tamponları ultrasonik doku homojenizatörleri kullanılarak verimli ve hızlı bir şekilde hazırlanabilir. Ultrasonicators karıştırma, çözme ve dağıtma için bir rüya aracı olduğundan, lizis tamponlarının güvenilir ve kullanıcı dostu bir şekilde hazırlanmasına izin verirler.
Lizis Tamponlarının Ultrasonik Hazırlanması
Ultrasonik doku homojenizatörleri hücre bozulması, lizis ve ekstraksiyon için ortak bir araçtır, bu nedenle çoğu laboratuvarda mevcuttur. Prob tipi ultrasonicators için ikincil bir uygulama lizis tamponlarının hazırlanmasıdır.
Lizis tamponu, açık (liz) hücreleri kırmak ve aşağı akış analizi için içeriklerini serbest bırakmak için kullanılan bir çözeltidir. Lizis tamponunun spesifik bileşimi, lize edilen hücrelerin tipine ve aşağı akış uygulamasına bağlı olarak değişebilir. Bununla birlikte, tipik bir lizis tamponu deterjanlar, tuzlar ve proteaz inhibitörleri gibi bileşenler içerir. Tamponlama tuzları (örneğin Tris-HCl) ve iyonik tuzlar (örneğin NaCl), lizatın pH'ını ve ozmolaritesini düzenlemek için yaygın olarak kullanılır.
Bir lizis tamponu yapmak için, bileşenler uygun konsantrasyonlarda ve pH'da birlikte karıştırılır. Karışım genellikle bileşenler çözülene ve çözelti homojen olana kadar karıştırılır veya çalkalanır.
Ultrasonik homojenizasyon, bileşenlerin karıştırılmasını ve çözünmesini geliştirerek iyi bir lizis tamponu yapmaya yardımcı olmak için kullanılabilecek bir yöntemdir. Bu yöntemde, ultrason dalgaları – normalde 20 ila 30 kHz aralığında – çöken ve yoğun yerel enerji üreten kavitasyon kabarcıkları oluşturan karışıma uygulanır, bu da bileşenlerin mekanik olarak kesilmesine ve karıştırılmasına neden olur.
Ultrasonik homojenizasyon işlemi, bileşenlerin herhangi bir kümesini veya agregasını parçalamaya yardımcı olabilir ve çözeltinin düzgün bir şekilde karıştırılmasını sağlayabilir. Sonuç olarak, bu tür geliştirilmiş lizis tamponu, daha verimli hücre bozulmasına ve ekstrakte edilen malzemenin daha yüksek verimine yol açabilir. Ek olarak, ultrasonik homojenizasyon, geleneksel karıştırma veya sallama yöntemlerine kıyasla bir lizis tamponu yapmak için gereken süreyi azaltabilir.
Genel olarak, ultrasonik homojenizasyon, lizis tampon hazırlığının kalitesini ve verimliliğini artırmak için güçlü bir araçtır.
Ultrasonik Lizis Tampon Hazırlığı için Protokol
Bu, prob tipi ultrasonicator kullanarak bir lizis tamponu yapmak için genel bir protokoldür:
Malzeme:
- Tercih edilen deterjan(lar) (örneğin Triton X-100, SDS, CHAPS)
- Tercih edilen tuz(lar) (örneğin NaCl, KCl)
- Proteaz inhibitörleri (örneğin PMSF, aprotinin, leupeptin)
- ultrasonikatör
- Karıştırıcı
- Deiyonize su
- pH metre veya pH şeritleri
Adım adım Talimatlar:
- Lizasyon yapacağınız hücrelere veya dokuya ve lizatı kullanacağınız aşağı akış uygulamalarına bağlı olarak lizis tamponunun bileşimini belirleyin. Deterjanların, tuzların ve proteaz inhibitörlerinin stok çözeltilerini istenen konsantrasyonlarda hazırlayın.
- Deterjanların, tuzların ve proteaz inhibitörlerinin stok çözeltilerini bir beher veya şişeye ekleyin.
- Hacmi istenen tampon miktarına getirmek için deiyonize su ekleyin.
- Ön karışım çözeltisi elde etmek için bileşenleri bir karıştırıcı kullanarak karıştırın.
- Bir pH metre veya pH şeritleri kullanarak tamponun pH'ını ölçün ve pH'ı az miktarda asit veya baz ile gerektiği gibi ayarlayın.
- Son derece homojen bir çözelti elde edilmesi için ön karışım çözeltisini homojenize etmek için prob tipi ultrasonicator kullanın. Bu nedenle, çözelti iyice karışana ve herhangi bir küme veya agrega parçalanana kadar çözeltiyi birkaç saniye sonikleştirin. Sonikasyonun süresi ve gücü, kullanılan belirli lizis tamponu ve ultrasonicator temelinde optimize edilebilir.
- Ultrasonikasyondan sonra, tamponun pH'ını yeniden ölçün ve gerektiği gibi ayarlayın.
- Sonikasyon sırasında oluşmuş olabilecek herhangi bir enkaz veya agregayı gidermek için tamponu 0.2 mikron filtreden geçirin.
- Lizis tamponu artık kullanıma hazırdır.
Not: Lizis tamponunun tam bileşimi ve pH'ı, lize edilen hücrelere veya dokuya ve aşağı akış uygulamalarına bağlı olarak değişebilir. Yukarıdaki protokol genel bir kılavuzdur ve belirli uygulamalar için optimize edilmesi gerekebilir.
Ultrasonik homojenizatörler yaygın hücre bozulması ve hücre içi moleküllerin ekstraksiyonu için kullanılır. Bu nedenle birçok lizis uygulaması, sadece lizis tamponunun hazırlanması için değil, aynı zamanda mekanik hücre bozulması ve ekstraksiyonu için de prob tipi sonikasyon kullanır.
Bu, ultrasonik doku homojenizatörlerini laboratuvarlar için çok yönlü bir araç haline getirir ve mikrobiyoloji, biyoteknoloji ve yaşam bilimlerinde ultrasonicators'un geniş kullanımını açıklar.
ultrasonik laboratuvar homojenizatörleri
Hielscher Ultrasonics üretir ve çeşitli güç derecelendirmeleri ve örnek hacimlerinde ultrasonik homojenizatörler ve problar (sonotrodes) sağlar. Bu, numune hazırlamanız için size en uygun ultrasonik bozucuyu sunmamızı sağlar. En yüksek kaliteye, olağanüstü kullanıcı konforuna ve güvenilir sonikasyon sonuçlarına odaklanıyoruz. Tüm dijital ultrasonicators akıllı yazılım, programlama ve sonication protokolleri, tarayıcı uzaktan kumandası, sıcaklık kontrolü, örnek aydınlatma yanı sıra dahili bir SD kart üzerinde otomatik veri kaydı ön ayarı özellikleri.
Tasarım, İmalat ve Danışmanlık – Almanya'da Üretilen Kalite
Hielscher ultrasonicators iyi onların en yüksek kalite ve tasarım standartları için bilinir. Sağlamlık ve kolay kullanım, ultrasonicator'larımızın endüstriyel tesislere sorunsuz entegrasyonunu sağlar. Zorlu koşullar ve zorlu ortamlar kolayca Hielscher ultrasonicators tarafından ele alınır.
Hielscher Ultrasonics, ISO sertifikalı bir şirkettir ve state-of-the-son teknoloji ve kullanıcı dostu özelliğine sahip yüksek performanslı ultrasonicator'lara özel önem vermektedir. Tabii ki, Hielscher ultrasonicators CE uyumlu ve UL, CSA ve RoHs gereksinimlerini karşılamak.
The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators:
|UP200St at VialTweeter||200W||26kHz||Küçük şişeler, mesela, ultrasonikasyon Eppendorf 1.5mL|
|UP50H||50w||30kHz||elde veya standmounted laboratuar homojenleştirici|
|UP100H||100W||30kHz||elde veya standmounted laboratuar homojenleştirici|
|UP200Ht||200W||26kHz||elde veya standmounted laboratuar homojenleştirici|
|UP200St||200W||26kHz||standmounted laboratuvar homojenleştirici|
|UP400St||400w||24kHz||standmounted laboratuvar homojenleştirici|
|SonoStep||200W||26kHz||Laboratuar reaktör birleştirerek, ultrasonikasyon, pompa, karıştırıcı ve damar|
|GDmini2||200W||26kHz||kirlilik içermeyen akış hücresi|
|CupHorn||200W||26kHz||şişeler ve beherler için yoğun ultrasonik banyo|
|UIP400MTP||400w||24kHz||Çok kuyulu plakalar / mikrotiter plakalar için ultrasonik sistem|
Bizimle iletişime geçin! / Bize sor!
Edebiyat / Referanslar
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.