Emerman Lab, kanonik olmayan bir NFkB yolunu (imflamatuvar yanıtın bir parçası) aktive eden bir LRA olan küçük molekül AZD5582’yi CRISPR ekranlarıyla birleştirdi. “Bunu keşfettik Büyüme İnhibitörü Aile Üyesi (ING3) AZD5582 tedavisi ile birlikte nakavt, J-Lat hücrelerinde viral reaktivasyonun artmasıyla sonuçlandı [a type of in vitro T-lymphocyte-based HIV-1 latency model] ve HIV-1 gecikmesinin birincil CD4+ T hücre modeli,” diye açıkladı Dr. Emerman. Bununla birlikte, ekibin ayrıca yaklaşımlarının HIV provirüslerinin transkripsiyonunu özellikle etkilediğini – dolayısıyla Henikoff Laboratuvarı’ndan Dr. Derek Janssens ile işbirliğini – etkilediğini göstermek zorunda kaldı. Emily, “CUT&Tag teknolojisini yeni bir HIV-1 gecikme bağlamında başarılı bir şekilde uygulayabildik ve bunu, tarama bulgumuzun tüm konak destekçilerini hedeflemek yerine HIV-1 LTR’ye özgü ve etkili olduğunu göstermek için kullandık” dedi. Dr. Janssens, “HIV provirus barındıran hücrelerin kombinasyon terapilerine genom çapında transkripsiyonel yanıtını incelediğimizde, HIV provirus aktivasyonunun oldukça spesifik olduğunu gördük. Bu, genetik tarama yoluyla tanımladığımız iki yolun, HIV provirüsünü genomda neredeyse benzersiz bir şekilde düzenlemek için gerçekten birleştiği hipotezimizi doğruladı.”
Genel olarak, bu proje HIV-1 gecikmesini anlamak ve potansiyel olarak tersine çevirmek için güçlü bir adımı temsil etti – ancak her zaman olduğu gibi, daha fazla soru var. Emily, “Tüm farklı transkripsiyonel ve epigenetik mekanizmaların HIV-1 gecikmesini oluşturmak ve sürdürmek için birlikte nasıl etkileşime girdiğini anlamakla ilgileniyoruz” diye araya girdi. “Sonuç olarak, ekranı farklı LRA’lar veya hatta LRA kombinasyonları kullanarak gerçekleştirmekle ilgileniyoruz. Ek olarak, çeşitli hücre tiplerinde ve birincil hücrelerde HIV-1 gecikmesinin moleküler mekanizmalarının benzer veya farklı olup olmadığını anlamakla ilgileniyoruz, bu nedenle ekranı tüm bu farklı varyasyonlarla gerçekleştirmek istiyoruz.” Dr. Janssens, “Bence birçok soru kaldı,” diye onayladı. “Bu, kavramın kanıtıydı – ancak HIV gecikmesini tersine çevirmek için klinik olarak kombinasyon terapilerini kullanabilir misiniz? [Can] Bu çalışmada kullanılan genetik tarama stratejisini daha da iyi sonuç verebilecek ek kombinasyon tedavilerini belirlemek için genişlettik mi? Tanımladığımız transkripsiyonel mekanizma neden HIV provirüsüne neredeyse benzersiz?” Dr. Emerman, “laboratuvardaki diğer kişilerin, gecikme tersine çevrilmesi için daha fazla ipucu keşfetmek için hem epigenetik kitaplığı hem de bir transkripsiyon faktörü kitaplığı ile birlikte ek LRA kombinasyonlarını test ettiğine” dair bana güvence verdi. bu ve diğer sorular.
Emily, “Bu çalışma, çoğu Hutch’ta olan inanılmaz sayıda işbirlikçi tarafından mümkün kılındı,” diyerek sözlerini tamamladı. “Bu işbirlikçilerle ve Hutch’taki diğer pek çok kişiyle birçok yararlı ve yaratıcı tartışma yapmak büyük bir ayrıcalıktı ve bu teşvik edici bilimsel topluluğun bir parçası olduğum için çok minnettarım.” Janssens coşkuyla kabul etti: “Bu proje, Hutch’taki birden fazla laboratuvar arasında eğlenceli bir işbirliğiydi. İşbirlikçilerimizin coşkusu gerçekten ilham vericiydi ve Hutch’ta çalışmayı bu kadar özel yapan şeyin bir parçası.”
.