Sonication zaten açık hücrelerin moleküler, kolüler, hücresel, mikrobiyoloji ve diğer laboratuarlarda yırtılmasında yaygın olarak kullanılmaktadır. Sonikasyon işlemi sırasında hücrelerin kimyasal bileşimleri veya tamponları değişmeden kalır ve hücrelerin yükü elektroporasyon işleminde olduğu gibi değişmez. Sonication oldukça basit bir yöntemdir ve deney ve hücre türlerine göre sadece birkaç ipucu takip edilmelidir.
Süreç
Başlangıç için uygun tampon veya ortamda bir hücre dispersiyonu hazırlayın, dispersiyonu daha fazla soğutma için bir buz veya buzlu su kabına yerleştirin. Sonikasyon cihazının ağzını suyla yıkayın, ardından bir Kimwipe ile kurulayın. Sonication veya Cell Disruptor makinesini açın, Çıkış Gücünü hücre tipine ve deney durumuna göre uygun bir değere ayarlayın. Sonikatörün nozülünü hücre numunesi tüpüne batırın, 5 ila 30 saniye boyunca sonikasyon yapmak için sonikatörü açın. 30 saniyeden daha uzun sonikasyonun numunenin aşırı ısınmasına veya hasar görmesine neden olabileceğine dikkat edin. Hacmin farklı alanlarının hepsinin iyi seslendirildiğinden emin olmak için, sonikasyon işlemi sırasında numune tüpünü nozül etrafında yavaşça hareket ettirebilirsiniz. Ayrıca, nozül ucunun hacim yüzeyinin yanına ulaşmamasını da sağlamalısınız. örnek kabarcıklanma veya köpürmeye neden olması durumunda. İlk sonikasyonun tamamlanmasından sonra, karıştırmak için numuneyi ters çevirin, numune buz üzerinde soğutulurken numuneyi tekrar eşit bir süre daha sonikasyon yapın.
Optimizasyon Önemlidir
Farklı hücre hatları için, genellikle farklı optimize edilmiş sonikasyon protokolleri bulunur. İyi kesilmiş hücreler ile hasar görmüş veya denatüre olanlar arasındaki ideal dengeyi tanımlamanız gerekir. En uygun hale getirilmiş protokol, sonikasyon süresi ve Çıkış Gücü ayarlarının miktarının ayarlanması ve ardından fraksiyonlama için bir mikroskop kullanılarak hücrelerin kontrol edilmesiyle elde edilebilir. Örneğin, ilk olarak% 50 Çıkış Gücü ayarlarıyla 5 saniyelik üç sonikasyon gerçekleştirebilirsiniz. Hücre popülasyonunun sadece küçük bir kısmı hasar görmüşse veya denatüre edilmişse, buna bağlı olarak sonikasyon süresini ve çıktı gücünü artırabilirsiniz.
Belirli bir örnek
Örneğin E. Coli hücrelerini alın. E. Coli hücreleri, bir yüzey reseptörü bağlayıcı proteinin (Clostridium perfringens enterotoksin veya “C-CPE” nin C-terminali parçası) büyümesi ve saflaştırılması için yoğun olarak kullanılır. Sonicaton için optimize edilmiş protokol: hücre hacmi – 7-10 mL; zaman miktarı – iki 30 saniyelik patlama; çıkış gücü: maksimum Çıkış Gücü. Hücre dispersiyon tamponu, 1x PBS ve 0.2 mg / ml lizozimi tehlikeye atar.
Ayrıca, E. Coli hücrelerinin sonikasyonuna yönelik sonikasyon makinesi Ultrasonik Hücre Yıkıcıdır .
Sunduğumuz Ultrasonik Ürünler
Did this article help you?
Click on a star to rate it!
Average rating / 5. Vote count: