Kan preparatı hazırlanması
Kanı almak için parmak ucu alkolle iyice silinir.
Frank iğnesi ile parmak ucu delinir.
Takriben 2mm3 kan damlası lam üzerine konur.
Kan damlası lamın kenarında 1cm kalacak şekilde konmalıdır.
Temiz bir lam veya lamel 30-45 derece dar açı yapacak biçimde damla üzerine getirilip açının şekli değişmeksizin lam üzerine değdirilir ve lam boyunca hızlı bir şekilde geriye doğru kaydırılır.
Lam özenle havada sallanarak olabildiğince çabuk kurutulur.
Burada en önemli nokta kanın pıhtılaşmasına meydan vermemek için hızlı hareket edilmesi ve kurutmanın çabuk yapılmasıdır.
İstenirse bu frotiler (yayılmış kan bulunan lam) saf alkol ya da alkol-eter karışımına batırılarak tespit edildikten sonra da kurutulabilir. Ancak, preparat Gieamsa ile boyanacaksa (boya alkollü bir eriyikte hazırlanacağından) daha önce bir tespit gereksizdir. Genellikle kan preparatları Giemsa veya May-Grünwald-Gieamsa ile boyanır.
Boyama safhası:
Giemsa ile olur. 10 damla kadar May-Grünwald damlatılır ve tüm kan kaplanır, böylece 3-4 dakika bekletilir. Sonra dökülerek giemsa ile boyanır.
Giemsa eriyiği metilen azun, metilen blue ve eosin boyalarını müşterek olarak bulunduran bir solüsyondur. Bu eriyik bu şekilde satılır.
Nukleusu menekşe, sitoplazmayı açık mavi veya pembe renge boyar. Azurophil tabiatındaki taneleri de koyu erguvani renkte boyar.
Gieamsa’nın hazırlanması: pH=6.8 olan nötr sudan 200 cc alınır. Üzerine 20-30 damla Gieamsa damlatılır.
66 ml Gliserin + 66 ml metil alkol + 1 gr Giemsa = Stok Giemsa
10 ml suya 1 ml Giemsa katılır.
Nötr suyun hazırlanması:
A- Na2HPO4.2H2O----2.440 gr sodyum hidrojen fosfat
B- KH2PO4-------------2.770 gr potasyum di hidrojen fosfot
Bu maddeler 250 cc’lik balon jojeye konur ve üstü saf su ile eklenir, eritilir. A ve B solüsyonundan eşit hacimde alınarak karıştırılır. A= 50, B= 50 alınırsa üzerine 150 cm3 saf su konur.
Metil alkol veya May-Grünwaldlı kanı ihtiva eden lam yüzeyi içinde cam çubuklardan yapılmış destekler bulunan petri kapları içine ters çevrilerek konur. Sonra;
Petri kabı içine yukarıda hazırlanışı izah edilen giemsa solüsyonundan dökülür.
Lam bu solüsyon içinde 30 dakika bırakılır.
30 dakikanın sonunda lam pH= 6.8 olan nötr su ile yıkanır.
Kanada balzamı ile kapatılır.