ÖzAmaç
Doğal bağışıklık sisteminde, konağın birincil savunması ve patojenlerin öldürülmesi nötrofillerin en önemli işlevlerinden biridir. Nötrofil aktivitesi ve göç, inflamatuvar koşullarda önemli bir rol oynar. Nötrofiller ve nötrofil göçü ile ilişkili bozukluklar hakkında bilgi edinmek için çok sayıda yöntem geliştirilmiştir. Ancak yüksek saflıkta nötrofil popülasyonlarının izole edilmesinin teknik sınırlamaları, izolasyon sırasında hem hücre ölümünü hem de aktivasyonu en aza indirgeyen nötrofillerin kısa ömrü, nötrofil göçü ile ilişkili hastalıklarda yapılan araştırmalarda nötrofillerin fonksiyonlarını inceleme aşamasında zorluklara neden olmaktadır. Bu çalışmada, yüksek oranda saflaştırılmış nötrofil popülasyonları elde etmek için yoğunluk gradyanı temelli ayırma çözeltisi kullanılan bir metodu değerlendirdik ve bu protokolü, nötrofil göçünü in vitro koşullarda incelemek için bir deney sistemi ile birleştirdik.Gereç ve Yöntemler
İnsan granülositleri, Lenfolit poli çözeltisi kullanılarak izole edildi. İzole edilmiş nötrofillerin saflığı ve canlılığı akım sitometrisi ve morfolojik analizler ile değerlendirildi. Nötrofillerin aktivasyonu immünositokimya ile doğrulandı. Son olarak, nötrofil göçünü-kemotaksisini ölçmek için filtre deneyi yapıldı.Bulgular ve Tartışma
Tüm validasyon deneyleri, bu izolasyon yöntemi ile, fonksiyonel deneyler için saflaştırılmış bir nötrofil popülasyonu elde edilebildiğini gösterdi. Sonuç olarak, nötrofil izolasyonu ve devamında hücre göçü analizlerini içeren bu çalışma; hızlı, uygun maliyetli ve takip edilmesi kolay bir model ortaya koymaktadır ve nötrofil popülasyonunu elde etmek için akım sitometrisi temelli hücre sınıflaması gibi ilave adımlar gerektiren izolasyon yöntemlerine önemli bir alternatif olabilir.Sonuç
İnsan nötrofillerinin izolasyonu ve fonksiyonel hücre göçü analizi için geliştirilen bu yöntemlerin, nötrofil göçünü içeren hastalık modellerinde kullanılması önerilir.