Summary
Sivrisinek midgut ve tükürük bezlerinin Plasmodium falciparum ve dang virüsü gibi vektör patojenler için anahtar giriş ve çıkış noktaları vardır. Bu video Aedes aegypti sivrisinek midgut ve tükürük bezleri kaldırmak için diseksiyon teknikleri göstermektedir.
Abstract
Sivrisinek midgut ve tükürük bezlerinin Plasmodium parazitler ve Dang virüsler gibi patojenler için anahtar giriş ve çıkış noktaları vardır. Bu video protokolü Aedes aegypti sivrisinek midgut ve tükürük bezlerinin çıkarılması için diseksiyon teknikleri gösteriyor.
Protocol
Sivrisinek midgut ve tükürük bezi dokuları Diseksiyon 1X Fosfat ön hazırlık immobilize ° C kadar sıcaklık 4 tabi Salin (1X PBS) çözümü ve sivrisineklerin anesthetization Tamponlu gerektirir. Sivrisinekler, soğuk buz üzerinde tutulur bir Petri kabındaki koyarak anestezi kalır. Için gerekli olan diğer malzemeler şunlardır: 10x amacı, pipet, ince uçlu forseps, cam slayt, iğne ucu probları ile donatılmış ışık mikroskobu.
Midgut diseksiyonu
- 1X PBS bir damla ışık mikroskobu altında monte edilmiş bir cam slayt üzerine yerleştirin.
- Bir sivrisinek, bir iğne ucu probu ile sivrisinek toraks bıçaklama tarafından hazırlanan slayt üzerine aktarın.
- Probu ile sivrisinek basılı tutarken, son karın segment ikinci kavramak için forseps kullanabilir ve tek bir hareket sivrisinek karın yavaşça çekin. Midgut immobilize toraks bağlı kalmalıdır.
- Karın atın. Forseps toraks midgut ayırmak için kullanın.
Tükürük bezi diseksiyonu
- 1X PBS bir damla ışık mikroskobu altında monte edilmiş bir cam slayt üzerine yerleştirin.
- Bir sivrisinek, bir iğne ucu prob ile toraks stabbling Pick up.
- Parmaklarınızı kullanarak sivrisinek bacaklar çekin.
- Sivrisinek slayt üzerine aktarın.
- Forseps kullanarak sivrisinek başkanı çıkarın.
- Probu ile sivrisinek toraks basılı tutarken, toraks yavaşça aşağı itmek için başka bir prob kullanın.
- Tükürük bezleri, toraks ön kısmı bulunan ve bir iğne ucu prob kullanarak ve toraks bezi bağlayan ekleri kesilmesinin izole edilebilir. Iki yan loblar ve medial lob: Bozulmamış tükürük bezleri üç loblar oluşur.