De Vos, M., Jander, G. Choice and No-Choice Assays for Testing the Resistance of A. thaliana to Chewing Insects. J. Vis. Exp. (15), e683, doi:10.3791/683 (2008).
Küçük beyaz lahana kelebek Larva tarım ayarlarında bir haşere. Bu tırtıl türler, lahana gibi birçok ürün lahana aile bitkiler, yemler, böceklerin brokoli, Brüksel lahanası vb Yetiştirme sera lahana bitkiler yer alır. Pieris rapae yetiştirme için en az iki kafesleri ihtiyaç vardır. Bir larva ve yetişkin, kelebekler içeren diğer. Bitki hormonları ve bu böcek haşere direnç zehirli bitki kimyasalları rolünü araştırmak amacıyla, iki deneyler göstermektedir. İlk olarak, çiğneme böcek Pieris rapae direnç Jasmonik asit (JA genellikle böceklerin direnç belirtilen bir bitki hormonu) rolünün belirlenmesi. Caterpillar büyüme JA üretiminde engelli yabani tip ve mutant bitkiler mukayese edilebilir. Larvaları sentezler veya eksik JA tek bir bitki varlığını zorunda çünkü bu deney, "No Choice" olarak kabul edilir. İkincisi, biz yöntemlerinin koloni (yumurtlama) sinyalleri olarak kullanılır glukosinolat, rolünü araştıran bir deney göstermektedir. Burada, dişi kelebekler yumurtalarını bırakmak için her iki genotip bitkiler üzerinde izin verilen bir "Seçim" deney glukosinolat üretim engelli WT ve mutant Arabidopsis kullanın. Bu video için deney düzeneği hem testlerin yanı sıra temsilcisi sonuçları göstermektedir.
No Choice Deney:
- Dikkatle, bir plastik bardak ilgi Arabidopsis bitki içine alın. Bu durumda: Col-0 (WT) ve JA üretimi bozulmuş bir mutant. Yapraklara zarar sınırı emin olun. Bunun için ben, bu fırça arka kullanın.
- Lahana koloni taze yumurtadan larva almak için ince bir fırça kullanın.
- Arabidopsis bitkiler üzerinde larva dikkatlice yerleştirin.
- 4 gün, 7, 10 Kilo larva. İPUCU: vejetatif büyümeyi artırmak için (1 larva 1 bitki tam yaşam döngüsü yerine) kısa günün koşulları (8 saat ışık) altında bitkiler büyümek.
Seçimi Deney:
- İki bitkiler, her biri bir genotip seçilir. Tepsi etkileri gibi diğer faktörler, vb sınırlamak için, aynı potada bitkiler büyümek için
- Bir kelebek kafes bitkiler yerleştirin.
- Doğurgan kadın seçin. Ben genellikle, aktif yetiştirme koloni yumurtlayarak bir kadın yakalamak.
- 24 saat için iki bitki seçimi ile kafes kadın bırakın.
İpucu 1: sonraki seçmeli testler için bir öğrenme etkiler ortadan kaldırmak için, kadın yeniden yoktur.
İPUCU 2: Bir tek benzer bir büyüme fenotipi bitkileri karşılaştırın. Alternatif olarak, her genotip Erlenmeyer şişesinin üstünde bir yaprak montaj ve kendi çekiciliğini bir kadın karşılaştırın.
Bitki Biyoloji Yıllık Yorumları ziyaret ediniz böcek herbivory bu protokol ve bitki bağışıklık hakkında daha fazla bilgi için.